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.1999年3月；73(3):1909-17.
doi:10.1128/JVI.73.3.1909-1917.1999。

卡波西肉瘤相关疱疹病毒编码与EB病毒BZLF1同源的bZIP蛋白

S F林 1, D R罗宾逊, G米勒, H J Kung（香港）
附属机构

卡波西肉瘤相关疱疹病毒编码与EB病毒BZLF1同源的bZIP蛋白

S F林等。 J维罗尔. 1999年3月.

摘要

卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）是最近发现的一种人类γ疱疹病毒，与艾滋病相关肿瘤密切相关。我们在这里报告了KSHV基因组中一个名为K-bZIP的蛋白基因的鉴定，该蛋白属于碱性亮氨酸拉链（bZIP）转录因子家族。K-bZIP与BZLF1具有显著同源性，在EB病毒的复制和活化中起关键作用。K-bZIP是一种由237个氨基酸组成的同源二聚蛋白，在C末端具有原型bZIP结构域。K-bZIP的N端部分源自K8开放读取帧，该帧通过帧内拼接与ZIP域邻接。快速分析cDNA末端，然后克隆整个cDNA，揭示了这种结构。在经12-O-十四烷基佛波-13-乙酸酯处理的BCBL-1细胞中检测到编码K-bZIP的1.35-kb转录本。该转录物的合成被蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺阻断，但没有被病毒DNA合成抑制剂磷酸酯酶阻断，因此将其归类为早期裂解基因。核糖核酸酶保护分析进一步定位了1.35-kb K-bZIP mRNA的主要转录起始位点，并确定了另外两个剪接变异体，它们用K-bZIP的N末端部分编码蛋白质，但缺少C末端ZIP结构域。全长K-bZIP与自身形成二聚体，并且包含ZIP结构域的C末端是该过程所必需的。我们的研究为理解K-bZIP在KSHV基因组复制和活化中的作用奠定了基础。

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数字

图1
图1
KSHV ORF K8转录物的RACE分析。（A） 本研究中使用的ORF K8和RACE引物的基因组位置示意图。括号中的核苷酸坐标来自参考文献。底漆方向用箭头表示。草图未完全按比例绘制。AATAAA，聚腺苷酸化信号；ORF，开放式阅读框；SA，剪接受体；SD，剪接供体；信托收据L（左）：左端终端重复；信托收据R（右），右端的终端重复。RACE产品的（B至D）琼脂糖凝胶（1%）电泳。（B） 5′RACE，以K8-AS-N或K8-AS作为3′引物。（C） 3′RACE，以K8-S作为5′引物。（D） K-bZIP的全长cDNA由K8FL-S1和K8FL-AS1（车道1）或K8FL-S2和K8FL-AS1放大（车道2）。产生的PCR片段比基因组序列预期的大小短约0.8 kb（1区为1.2 kb而非2 kb，2区为1.0 kb而不是1.8 kb），表明发生了剪接事件。
图2
图2
K-bZIP序列分析。（A） 通过RACE克隆获得的三类cDNA摘要。外显子表示为带有罗马数字的开盒。外显子之间的IVS用波浪线表示。与每个转录物对应的肽以实线表示。*，翻译停止密码子；+++，基本区域。氨基酸。（B） K-bZIP cDNA序列的精细结构。来自最长cDNA的核苷酸序列被装箱，并以大写形式显示。内含子以小写显示，共有剪接供体和剪接受体位点以粗体显示。从三个外显子推导出的K-bZIP的237个氨基酸被描绘在核苷酸序列下面。七肽重复亮氨酸和异亮氨酸被圈起来。序列的基因组坐标（42）如左图所示。文中讨论的特征强调如下：74627处的tga，Rta/ORF 50的翻译终止密码子；74816，假定为K-bZIP的TATA箱；atg at 75915，ORF K8.1的翻译起始密码子；AATAAA位于76714，聚腺苷化识别序列。（C） K-bZIP的bZIP结构域与代表性人类bZIP转录因子的结构域的比较。每个序列的登录号如下：CEBA（CCAAT/增强子结合蛋白α，P49715）；JUN（转录因子AP-1，P05412）；低聚果糖（p55c-福斯原癌基因蛋白，P01100）；CREB（环腺苷酸反应元件结合蛋白，P16220）。HHV8，第八种人类疱疹病毒。（D） K-bZIP的bZIP结构域与疱疹病毒同源物的比较：马立克氏病病毒（MDV）编码的MEQ癌蛋白生态Q片段，A44083）；BZLF1（EBV编码的BZLF1-transactivator蛋白，P03206）。氨基酸序列与ClustalW程序一致。保存的亮氨酸残基用圆点标记。深灰色阴影表示相同的残留物；浅灰色阴影表示类似的残留物。
图3
图3
核糖核酸酶保护分析。（A） K-bZIP转录起始位点的定位。50毫微克体外转录的[α-32P] 将来自pBS-P2（第4道）的UTP标记RNA与来自TPA处理的BCBL-1细胞（第1道）的15μg RNA或在68°C下与等量的酵母RNA（第3道）杂交10分钟。RNase A-RNase T1然后加入混合物以消化未混合的RNA。随后在6%聚丙烯酰胺-8 M尿素变性凝胶上解析RNA杂交体。含有ddA、ddC和ddG片段的测序反应作为DNA阶梯标记并行进行（第2道）。反义探针（实线）和预期转录物（波浪线）之间杂交的示意图显示在每个保护带的左侧。为了简单起见，核苷酸74850（K-bZIP基因中第一个ATG的A）被任意定义为1。（B） 拼接变体的映射。在与面板A所述条件相同的条件下进行反应，但50 ng的体外转录[α-32P] 来自pBS-IVS的UTP标记RNA用作探针。泳道1左侧的数字以碱基对为单位。
图4
图4
K-bZIP在BCBL-1细胞中的表达动力学。如图所示，用TPA处理BCBL-1细胞不同时间。在12和48小时的时间点，制备重复的细胞培养物，并分别用环己酰亚胺（CH，100μg/ml）或PAA（100μM）进行额外处理。在治疗结束时提取总RNA。每个样品中的20微克RNA被加载到每个通道中，并在电泳后转移到尼龙膜上。（A） 过滤器与K-bZIP特异性探针（核苷酸74850至75104）杂交。（B） 过滤器与ORF K8.1特异性探针（核苷酸75905至76207）杂交。通过将相同的过滤器与编码人RNase P（5）的H1 RNA的DNA杂交来测定RNA负载（下图）。
图5
图5
K-bZIP的二元化。回收并量化转染pcDNA3.1（通道1、5、9和13）、pHA-KBZIP（通道2、6、10和14）、pT7-KBZIP（通道3、7、11和15）或同时转染pHA-KB ZIP和pT7-KB ZIP（路径4、8、12和16）的COS-1细胞的总细胞蛋白，并在每次反应中使用等量的蛋白。免疫沉淀（IP）分析是通过将蛋白裂解物与针对T7标签（通道5至8）或HA标签（通道13至16）的单克隆抗体孵育来进行的，免疫复合物是用蛋白a蛋白G-Sepharose混合物捕获的。对来自总细胞裂解物或免疫沉淀的蛋白质样品进行Western blot（WB）分析，并用HA标签（A）或T7标签（B）抗体进行检测。过滤器是通过ECL方法开发的。Kd，千道尔顿；Ig-H和Ig-L分别是免疫球蛋白的重链和轻链。
图6
图6
K-bZIP的C末端是二聚体形成所必需的。将HA-K-bZIP和T7-K-bZIPΔLZ瞬时转染COS-1细胞48 h。在Western blot分析之前，用抗HA抗体（第3道）或抗T7抗体（第5道）免疫沉淀（IP）等分总蛋白提取物（第1道）。车道2和车道4为空白。用抗HA标签（A）或T7标签（B）的抗体检测Western blots（WB）。过滤器是通过ECL方法开发的。千道尔顿。
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    1. Arvanitakis L、Geras-Raaka E、Varma A、Gershengorn M C、Cesarman E。人类疱疹病毒KSHV编码与细胞增殖相关的组成活性G蛋白偶联受体。自然。1997;385:347–350.-公共医学
    1. Ausubel F M、Brent R、Kingston R E、Moore D D、Seidman J G、Smith J A、Struhl K。分子生物学的当前协议。纽约州纽约市：John Wiley&Sons，Inc。；1995
    1. Baer R、Bankier A T、Biggin M D、Deininger P L、Farrell P J、Gibson T J、Hatfull G、Hudson G S、Satchwell S C、Seguin C等。B95-8爱泼斯坦-巴尔病毒基因组的DNA序列和表达。自然。1984;310:207–211.-公共医学
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