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.1998年11月；72(11):8586-96.
doi:10.1128/JVI.72.11.8586-8596.1998。

新型Bcl-2相互作用蛋白beclin对致命性Sindbis病毒脑炎的保护作用

X H梁 1, L K克莱曼, H H Jiang先生, G戈登, J E高盛, G贝里, B赫尔曼, B莱文
附属公司

新型Bcl-2相互作用蛋白beclin对致命性Sindbis病毒脑炎的保护作用

X H梁等。 J维罗尔. 1998年11月.

摘要

bcl-2是原型细胞抗凋亡基因，可减少Sindbis病毒的复制，并可诱导小鼠脑细胞凋亡，从而对致命性脑炎起到保护作用。为了研究Bcl-2保护中枢神经系统免受Sindbis病毒感染的潜在机制，我们进行了酵母双杂交筛选，以在成年小鼠脑库中鉴定Bcl-2相互作用的基因产物。我们鉴定了一种新的60-kDa线圈蛋白Beclin，我们使用荧光共振能量转移显微镜证实了其与哺乳动物细胞中的Bcl-2相互作用。为了研究Beclin在Sindbis病毒发病机制中的作用，我们构建了表达全长人Beclin（SIN/Beclin。SIN/beclin感染小鼠的存活率（71%）显著高于SIN/beclinDeltaBcl-2BD（9%）或SIN/beclinstop（7%）感染小鼠的生存率（P<0.001）。与SIN/beclinDeltaBcl-2BD或SIN/beclstop感染的小鼠相比，SIN/beclin感染的小鼠大脑中的Sindbis病毒RNA阳性细胞更少，凋亡细胞更少，病毒滴度更低。这些发现表明，Beclin是一种新型的Bcl-2相互作用细胞蛋白，可能在抗病毒宿主防御中发挥作用。

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数字

图1
图1
推导了人Beclin的氨基酸序列。方框区域代表人体Beclin的Bcl-2-结合域（表1），下划线区域对应于预计具有线圈构象的区域。
图2
图2
Beclin mRNA和蛋白表达。（A） Northern印迹分析贝克林人和小鼠组织中的mRNA表达。sm.，小；m.，肌肉。（B） 用抗人Beclin肽的多克隆抗体对成人海马切片进行免疫过氧化物酶染色。箭头标记一个Beclin阳性神经元。放大倍数，×450。
图2
图2
Beclin mRNA和蛋白表达。（A） Northern印迹分析贝克林mRNA在人和小鼠组织中的表达。sm.，小；m.，肌肉。（B） 用抗人Beclin肽的多克隆抗体对成人海马切片进行免疫过氧化物酶染色。箭头标记了一个Beclin阳性神经元。放大倍数，×450。
图3
图3
flag Beclin蛋白构建体在病毒载体SIN中的表达/贝克林、SIN/贝克林停止，和SIN/贝克林ΔBcl-2BD。（A和B）用抗标记表位抗体M2（A）或多克隆兔抗Beclin抗血清（B）对病毒感染的BHK细胞裂解物进行Western blot分析。SIN第1车道/贝克林; SIN第2车道/贝克林停止；SIN第3车道/贝克林ΔBcl-2BD；车道4，空Sindbis病毒载体。SIN感染2天后用鼠脑抗标记表位抗体M2进行（C至E）免疫过氧化物酶染色/贝克林（C） 、SIN/贝克林停止（D）或SIN/贝克林ΔBcl-2BD（E）。放大倍数，×111。
图4
图4
表达Bcl-2和Beclin的COS7细胞的共焦激光扫描显微镜。pSG5共转染的（A和B）细胞/bcl-2基因和pSG5/flag-贝克林并用抗凝表位（A）和抗人Bcl-2（B）抗体染色。与pSG5共转染的（D和E）细胞/bcl-2基因和pSG5/flag-贝克林DBcl-2BD并用抗标记表位（D）和抗人Bcl-2（E）抗体染色。（C和F）面板A和B（C）以及面板D和E（F）的计算机叠加；黄色对应于FITC和罗丹明染色的重叠。共聚焦载玻片厚度为1μm。
图5
图5
Beclin和Bcl-2对感染Sindbis病毒株TE12。（A） SIN感染小鼠的存活曲线/贝克林、SIN/贝克林停止，和SIN/贝克林ΔBcl-2BD。数据表示四到六窝独立窝的综合生存概率。（B） SIN感染小鼠的存活曲线/bcl-2基因和SIN/bcl-2基因停止。数据表示三只独立幼崽的组合存活概率。
图6
图6
SIN的病毒生长/贝克林、SIN/贝克林停止，和SIN/贝克林小鼠脑内ΔBcl-2BD。每个数据点代表三到六只小鼠大脑的几何平均病毒滴度±SEM。
图7
图7
SIN感染小鼠脑内病毒RNA阳性细胞/贝克林、SIN/贝克林停止，和SIN/贝克林ΔBcl-2BD。每个数据点代表三到六只小鼠大脑每平方毫米大脑中Sindbis病毒信息感测RNA阳性细胞的平均±SEM数。
图8
图8
SIN感染小鼠脑内凋亡细胞核/贝克林、SIN/贝克林停止，和SIN/贝克林ΔBcl-2BD。每个数据点代表三到六只小鼠大脑每平方毫米大脑中ISEL阳性细胞核的平均±SEM数。
图9
图9
用于SIN感染小鼠大脑中病毒RNA（A至C）和ISEL（D至F）阳性细胞计算机定量图像分析的典型场显微照片/贝克林（A和D），SIN/贝克林停止（B和E）和SIN/贝克林图7和图8中的ΔBcl-2BD（C和F）。所有显微照片均取自感染后4天脑切片的丘区，与放大10倍观察到的图像相对应。箭头表示Image-ProPlus软件程序评分为阳性的代表性单元格。
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参考文献

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