跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
。1998年9月15日；95(19):11211-6.
doi:10.1073/pnas.95.19.11211。

整合素连接激酶对糖原合成酶激酶3和蛋白激酶B/AKT的磷酸肌醇-3-OH激酶依赖性调节

M Delcommunine先生 1, C棕褐色, V灰色, L路, J伍德盖特, S Dedhar公司
附属公司

整合素连接激酶对糖原合成酶激酶3和蛋白激酶B/AKT的磷酸肌醇-3-羟基激酶依赖性调节

M Delcommunine先生等。 美国国家科学院程序。 。

摘要

整合素链接激酶（ILK）是一种含有锚蛋白重复序列的丝氨酸-三氢嘌呤蛋白激酶，能够与整合素β1、β2和β3亚单位的细胞质域相互作用。上皮细胞中ILK的过度表达扰乱细胞外基质和细胞间相互作用，抑制悬浮诱导的凋亡（也称为Anoikis），并刺激凤尾鱼非依赖性细胞周期进展。此外，ILK诱导β-catenin的核移位，后者与T细胞因子/淋巴细胞增强子结合因子1（TCF/LEF-1）结合形成激活的转录因子。我们现在证明，ILK活性在细胞粘附到纤维连接蛋白以及通过胰岛素以磷脂酰肌醇-3-OH激酶[Pi（3）K]依赖的方式快速而短暂地受到刺激。此外，磷脂酰肌醇（3,4,5）三磷酸在体外特异性地刺激ILK的活性，此外，膜靶向的组成活性Pi（3）K在体内激活ILK。我们还证明ILK是Pi（3）K依赖性调节蛋白激酶B（PKB/AKT）和糖原合成酶激酶3（GSK-3）的上游效应器。具体而言，ILK可以在体外直接磷酸化GSK-3，当细胞中稳定或短暂过度表达时，可以抑制GSK-3活性，而激酶缺陷ILK的过度表达增强了GSK-3的活性。此外，激酶活性的ILK可以磷酸化丝氨酸-473上的PKB/AKT，而激酶缺乏的ILK严重抑制丝氨酸-479上PKB/AKT的内源性磷酸化，表明ILK参与激动剂刺激的、依赖Pi（3）K的PKB/AKT活化。因此，ILK是Pi（3）K依赖、细胞外基质和生长因子介导、PKB/AKT激活和GSK-3抑制的受体-最大效应器。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
ILK中磷脂酰肌醇脂质结合基序的鉴定。ILK残基180–212的氨基酸序列与指示蛋白质的PH域中发现的氨基酸序列进行比对。突出显示的氨基酸表明残基对磷脂酰肌醇脂质的结合至关重要（30）。
图2
图2
(A类)PtdIns（3，4，5）P3特异性刺激重组野生型ILK的活性体外。所示磷脂制备为脂质囊泡，如材料和方法并与ILK一起孵化。然后使用γ测定ILK活性32P-ATP和MBP作为外源底物。通过SDS/PAGE和放射自显影术检测磷酸化MBP。(B类)胰岛素刺激ILK活性。IEC-18细胞被血清饥饿过夜，然后暴露于胰岛素（100nM）达指定的时间段。ILK是从细胞提取物中进行免疫沉淀的，ILK活性通过使用MBP测定，如材料和方法将细胞与Wortmannin（200 nM）预孵育20分钟，可抑制Pi（3）K活性。底部显示了用抗ILK抗体进行Western blotting测定的每个提取物中ILK的等量。(C类)细胞粘附在纤连蛋白上刺激ILK活性。将IEC-18细胞缺血清过夜，重新悬浮在无血清培养基中，并在指定的时间段内粘附在涂有纤维连接蛋白（10μg/ml）的非组织培养塑料板上。去除非粘附细胞，并裂解粘附细胞。ILK激酶活性的测定如下所述B类Pi（3）K活性通过用Ly294002（50μM）预孵育细胞20分钟而受到抑制。底部显示了用抗ILK抗体的Western blotting测定的每个提取物中ILK的等效水平。通过磷光图像分析确定磷酸化程度的量化。数据如所示A类,B类、和C类是三个独立实验的代表。
图3
图3
NIH 3T3细胞中HA标记的组成活性P110 Pi（3）K-CAAX的稳定过度表达导致ILK活性增加，丝氨酸-473上PKB/AKT的组成性磷酸化。过表达Pi（3）K组成性活性膜靶向p110亚单位或激酶缺乏p110（15）的NIH 3T3细胞克隆在血清饥饿状态下18小时，然后使用MBP分析ILK活性或PKB/AKT丝氨酸-473磷酸化。通过用Ly294002（50μM）预孵育细胞15分钟，Pi（3）K活性受到抑制。通过抗HA抗体的Western blotting检测转染体中P110的表达（数据未显示）。
图4
图4
ILK抑制GSK-3活性。(A类)在稳定过度表达野生型ILK（ILK-13）、激酶缺乏型ILK或反义ILK（IL K-14）（-19）的细胞克隆中测量ILK和GSK-3活性，如材料和方法野生型ILK的过度表达导致ILK活性高，GSK-3活性受到强烈抑制。通过使用抗GSK-3抗体进行Western blot分析，细胞克隆中GSK-3蛋白的表达水平相似。(插入)不同IEC-18克隆中GSK-3活性的量化。所示数据是两个单独实验的平均值。(B类)ILK和HA标记GSK-3在HEK-293细胞中的瞬时转染。野生型ILK的共表达导致GSK-3活性的抑制，而激酶缺陷型ILK（ILK-KD）的共表达则导致与未转染ILK的细胞相比GSK-3的活性增强。通过使用抗HA抗体通过Western blot分析监测GSK–HA的表达来确定转染效率。(C类)ILK可以磷酸化GSK-3体外将重组激酶缺陷型GST–GSK-3偶联到谷胱甘肽-脑葡萄糖珠上，在含有32正磷酸盐。在30°C下培养2小时后，通过SDS/PAGE和放射自显影术检测磷酸化GSK。ILK没有磷酸化GST。
图5
图5
激酶缺陷型ILK抑制丝氨酸-473上PKB/AKT的磷酸化，野生型ILK直接磷酸化丝氨酸-471上PKB/AKT体外. (A类)在IEC-18细胞和野生型ILK过度表达（ILK-13）细胞或表达激酶缺乏ILK（ILK-KD，GH31R）的IEC-18电池中测定丝氨酸-473上PKB/AKT的磷酸化状态（18，19）。对生长在含有组织培养基的血清（5μg/ml）中的细胞进行裂解，并使用抗PKB/AKT抗体或丝氨酸-473磷酸特异性抗体对提取物进行Western blotting分析。PKB/AKT在所有细胞系中以同等水平表达，但丝氨酸473磷酸化的PKB/AKT在表达激酶缺陷型ILK的细胞中被显著抑制。(B类)用HA标记的PKB/AKT瞬时转染激酶缺陷ILK可抑制PKB/AKT的丝氨酸-473磷酸化。PKB/AKT与野生型ILK共转染可增强丝氨酸-473的磷酸化，而与激酶缺陷型ILK的共转染则可抑制PKB/AKT的丝氨酸-473-磷酸化。通过使用抗HA抗体的蛋白质印迹分析分析PKB/AKT-HA的表达来监测转染效率。(C类)ILK直接磷酸化丝氨酸-473上的PKB/AKT体外将偶联到谷胱甘肽Sepharose珠的重组GST-PKB/AKT与重组GST-ILK（75ng）一起或不与重组GST-ILK一起在激酶反应缓冲液中孵育。在30°C下2小时后，沉淀GST-PKB/AKT珠，并通过Western blot分析进行分析。在ILK存在或不存在的情况下，检测到的PKB/AKT数量是相等的，而丝氨酸-473磷酸化的PKB/AKT只有在ILK的存在下才能检测到。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 《向下的科学杂志》。1997;279:673–674.-公共医学
    1. King W G、Mattaliono M D、Chan T O、Tsichlis P N、Brugge J S.Mol Cell Biol。1997;17:4406–4418.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Thomas G，Hall M N.Curr《细胞生物学》。1997;9:782–787.-公共医学
    1. Bellacosa A，Testa J R，Staal S P，Tsichllis P N.科学。1992;254:244–247.-公共医学
    1. Cheng J Q、Ruggeri B、Klein W M、Sonoda G、Altomare D A、Watson D K、Testa J R.Proc Natl Acad Sci USA，1996年；93:3636–3641.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语