Yeast Ty1 retrotransposition is stimulated by a synergistic interaction between mutations in chromatin assembly factor I and histone regulatory proteins

doi:10.1128/MCB.18.8.4783

.1998年8月；18(8):4783-92.

doi:10.128/MCB.18.8.4783。

染色质组装因子I和组蛋白调节蛋白突变之间的协同作用刺激酵母Ty1逆转录转座子

Z Qian先生¹, H黄, J Y Hong（J Y洪）, C L伯克, S D约翰斯顿, J伯曼, 卡罗尔, S W利伯曼

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预防性维修识别码：项目经理109064
DOI（操作界面）： 10.1128/MCB18.8.4783

染色质组装因子I和组蛋白调节蛋白突变之间的协同作用刺激酵母Ty1逆转录转座子

Z Qian先生等。分子细胞生物学. 1998年8月.

.1998年8月；18(8):4783-92.

doi:10.1128/MCB.18.8.4783。

作者

Z Qian先生¹, H黄, J Y Hong（J Y洪）, C L伯克, S D约翰斯顿, J伯曼, 卡罗尔, S W利伯曼

附属

¹美国伊利诺伊州芝加哥市伊利诺伊大学生物科学系，邮编：60607。

采购管理信息： 9671488
预防性维修识别码：项目经理109064
DOI（操作界面）： 10.1128/立方米.18.4783

摘要

对增加Ty1和Ty2转座到染色体靶点的速率的宿主突变进行筛查，以确定影响逆转录因子转座的因素。在进行此筛查的菌株中，偶然出现CAC3基因突变，这使我们发现CAC3和hir3的双重突变，但这两个单一突变都没有导致逆转录转座率的急剧增加。我们进一步表明，这种效应并不是由于Ty1 mRNA总水平的增加。两种微妙的cac3表型，即轻度甲基磺酸甲酯（MMS）敏感性和端粒沉默减少，在cac3 hir3双突变体中显著增强。此外，双突变体的生长速度降低。HIR3属于一类调节组蛋白转录的HIR基因，而Cac3p与Cac1p和Cac2p一起形成染色质组装因子I。cac和HIR基因的其他突变组合（cac3 hir1、cac3 hir2和cac2 HIR3）也会增加Ty转座和MMS敏感性，并降低生长速率。根据染色质结构的改变，提出了一个解释cac和hir突变之间协同相互作用的模型。

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数字

图1
Ty1转座分析。最常见的方式⁻含有无启动子的菌株*his3-Δ4*上图中的等位基因恢复为他的⁺通过插入上游Ty1元件。这种插入是通过400到500-bp PCR扩增物的出现来检测的，当*HIS3型*使用（His3）和δ元素（U5-in）引物。当*HIS3型*使用了（1His3）和δ元素（U3-in）引物，表明Ty1元素必须位于指定的方向才能引起His⁺逆转。方框中的箭头指示转录的方向。

图2
描述*高温气冷堆1*突变体。（A）补充*高温气冷堆1*彩信灵敏度。L1356（野生型[WT]）和L1561的转化子(*高温气冷堆1*)用指示的质粒（YCp50、pCAC3和pHIR3）从−Ura斑点到YPD和YPD加0.02%MMS上。（B）的本地化*高温气冷堆1*-互补活动。质粒pCAC3（顶部）和pHIR3（底部）中克隆片段的限制性内切酶图谱以及文本中描述的亚克隆DNA片段，片段补充了MMS敏感性；−，没有发生互补。箭头指示转录的方向。限制位点缩写如下：B，巴姆嗨；比格，*Bgl公司*II类；B、，*Bss公司*HII；C、，克拉我；E、，生态RI；H、，*Hin公司*dIII；K、，千磅我；S、，萨尔我；锡，斯纳商业智能；服务提供商，速度我；P、，*Pst（磅/平方英尺）*我；X、，*Xho公司*我；和Xb，*Xba公司*I.（C）删除*HIR3型*不影响Ty1 mRNA水平。Ty1（和Ty2）与*TEF1标准*来自L1356和等基因的（内部对照）mRNAhir3:：LEU2缺失菌株L1675。

图3
这个*高温气冷堆1*突变抑制了*HTA1-HTB1型*并且未能补充*希尔3*在无HU（−）或有HU（+）的情况下生长30分钟后进行RNA印迹分析。通过杂交SL1006-1B形成二倍体(*高温气冷堆1*)和SL1006-1D(*HTR1型*)带W303(*HIR3型*)和W303Δ3(*希尔3*). 组成转录基因*项目报告1*由于其丰度不受HU影响，因此被用作内部负荷控制。

图4
的双重突变希尔和*计算机辅助计算*导致彩信敏感。（A）删除*HIR3型*在以下情况下导致彩信敏感*碳酸钙*或*碳酸钙*发现L1356包含相关突变，*钙3-1*.升1356(*cac3 HIR3*)用YCp50或pCAC3转化，L1675(*碳酸钙hir3*)用YCp50、pCAC3或pHIR3转化。细胞在−Ura培养基上生长，然后在YPD和YPD加0.025%MMS上发现。紫外线照射为90焦耳/米²（B）删除*HIR3型*,*希尔1*，或*HIR2型*L1356中的导致MMS敏感。通过在YPD上用0.02%MMS（30°C孵育2天）检测10倍连续稀释的细胞，对MMS敏感性进行评分。

图5
沉默和生长缺陷*hir3碳酸钙*双缺失突变体。菌株UCC4543（野生型[WT]）及其缺失衍生物L1678(*碳酸钙*)，L1687(*希尔3*)和L1688(*碳酸钙hir3*)使用了。（A）端粒VII-L定位的沉默*SUP4-o型*(*SUP4-o-TEL公司*)发布于*hir3碳酸钙*双缺失突变体。的表达式*SUP4-o-TEL公司*通过在SC（对照）和−Ade上点取10倍系列稀释液并在30°C下培养平板4天来进行分析。The slight increase in growth of the希尔3−Ade上显示的菌株不可再生。（B）删除两者*希尔3*和*CAC3公司*延缓细胞生长。将指示的菌株稀释，置于YPD上，并在20°C下培养。

图6
HA标记Hir3p的核定位。（A） L1675中HA-Hir3p的免疫金标记。（B） YJB2306中HA-Hir3p的间接免疫荧光和4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI）染色。

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