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.1998年2月13日;273(7):3854-60.
doi:10.1074/jbc.273.7.3854。

利用嵌合蛋白激酶鉴定丝裂原活化蛋白激酶ERK5的底物和调节因子

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利用嵌合蛋白激酶鉴定促分裂原活化蛋白激酶ERK5的底物和调节因子

J M英语等。 生物化学杂志. .
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摘要

细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)是一种新近发现的孤儿有丝分裂原活化蛋白激酶,其底物或强激活剂尚未被描述。两个ERK5嵌合体被创造出来作为一种新的方法来发现其底物和上游调控因子。一个嵌合蛋白包含ERK5催化核心的N末端结构域(子域I-IV)和ERK2催化核心的C末端结构域。这种嵌合体对体外和细胞内调节ERK2的刺激具有高度反应性。第二种嵌合蛋白由ERK2的N-末端结构域(亚结构域I-IV)和ERK5催化核心的C-末端结构域(亚结构域V-XI)组成。该嵌合体在细菌中通过与MEK1的组成活性突变体共表达而被激活。利用激活嵌合体,我们鉴定了ERK5的三种体外底物。通过使用这些底物之一c-Myc检测免疫复合物中ERK5的活性,我们确定ERK5催化域由V12 H-Ras激活,在较小程度上由佛波酯激活,但不由Raf-1的组成活性突变体激活。因此,ERK5是可能与c-Myc沟通的新型Ras效应器途径的靶点。

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