Temperature-induced expression of yeast FKS2 is under the dual control of protein kinase C and calcineurin

doi:10.1128/MCB.18.2.1013

.1998年2月；18(2):1013-22.

doi:10.1128/MCB18.21013。

温度诱导酵母FKS2的表达受蛋白激酶C和钙调神经磷酸酶的双重控制

C赵¹, 美国荣格, P加勒特·恩格尔, T罗伊, M S塞尔特, D E莱文

附属公司

PMID： 9447998
预防性维修识别码：项目编号108813
内政部： 10.1128/立方米.18.2.1013

温度诱导酵母FKS2的表达受蛋白激酶C和钙调神经磷酸酶的双重控制

C赵等。分子细胞生物学. 1998年2月.

.1998年2月；18(2):1013-22.

doi:10.1128/MCB18.21013。

作者

C赵¹, 美国荣格, P加勒特·恩格尔, T罗伊, M S塞尔特, D E莱文

附属

¹约翰霍普金斯大学公共卫生学院生物化学系，美国马里兰州巴尔的摩21205。

PMID： 9447998
预防性维修识别码：项目编号108813
内政部： 10.1128/MCB18.21013

摘要

FKS1和FKS2是葡聚糖合酶复合体的替代亚单位，负责合成1,3-β-葡聚糖链，这是酿酒酵母细胞壁的主要结构聚合物。在最佳条件下，FKS1的表达在生长过程中占主导地位。相反，FKS2的表达是由交配信息素、高细胞外[Ca2+]、低碳源生长或fks1突变诱导的。诱导FKS2表达以响应信息素、CaCl2或FKS1功能的丧失需要Ca2+/钙调素依赖性蛋白磷酸酶钙调神经磷酸酶。因此，由于FKS2的表达不足，钙调神经蛋白（CNB1）和FKS1的双突变是不可能的。为了确定FKS2表达的新调节器，我们分离了其过度表达可消除fks1突变生存能力所需钙调神经磷酸酶的基因。通过此筛选，确定了由RHO1 G蛋白控制的细胞完整性信号通路的两个成分（MKK1和RLM1）。这种信号通路在中等高温下的生长过程中被激活。我们证明，钙调神经磷酸酶和细胞完整性途径通过可分离的启动子元件平行发挥作用，在39℃的生长过程中诱导FKS2表达。因为RHO1也充当葡聚糖合成酶的调节亚单位，我们的结果定义了一个调节回路，RHO1通过该调节回路控制该酶复合物的活性和其至少一个组分的表达。我们还表明，在低碳源上生长期间FKS2的诱导是对葡萄糖消耗的反应，并且受SNF1蛋白激酶和MIG1转录阻遏物的控制。最后，我们发现FKS2的表达是在细胞通过SNF1-、钙调神经磷酸酶-和细胞完整性信号独立途径进入稳定期时诱导的。

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数字

图1
抑制*cnb1Δfks1*Δ高拷贝数突变*MKK1型*或*RLM1型*.酵母菌株PGY318，用YEp351转化(*MKK1型*)，是351(*RLM1型*)或YEp351，划线到补充有2%葡萄糖或2%半乳糖的SD-Leu培养基上，并在30°C下培养。

图2
抑制*mpk1Δfks1*Δ突变体和*rlm1Δfks1*Δ高拷贝数突变*FKS2型*.酵母菌株PGY440和PGY48，用YEp352转化(*FKS2型*)或YEp352，划线到补充2%葡萄糖或2%半乳糖的SD-Ura培养基上，并在30°C下培养。

图3
钙诱导*FKS2型*该基因独立于细胞完整性途径的信号传导。野生型对数期培养物（1788年）和*bck1号机组*Δ（DL251）细胞在存在或不存在30mM CaCl的情况下在23°C下生长₂在指定的时间内。在指定时间后分离的总RNA被探测*FKS2型*和*行动1*mRNA。*FKS2型*mRNA标准化为*行动1*mRNA。这个*行动1*-归一化的*FKS2型*无CaCl条件下生长的野生型细胞的mRNA水平₂被任意指定为值1。野生型；肌动蛋白，*行为1*

图4
温度引起的*FKS2型*mRNA。累计*FKS1（FKS1）*,*FKS2型*、和*RHO1型*在野生型（YPH499）和*中国广播公司1*Δ（MCY3-1D）电池。细胞生长为一个₆₀₀在23°C下，含2%葡萄糖的YEP中0.5至1。通过添加等量的预加热至55°C的新鲜培养基，然后在39°C下培养并搅拌指定时间，可立即将温度转变至39°C。检测总RNAFKS2型,*FKS1（FKS1）*,*RHO1型*、和*行动1*mRNA。野生型；肌动蛋白，*行为1。*

图5
生长温度对谷胱甘肽酶活性的影响*福克斯1*Δ和*平方英尺*Δ突变体。（A）野生型（YPH499）和*福克斯1*Δ（PGY5）细胞从23℃的对数生长转变为39℃的生长。在换班后0和6小时分离的总RNA进行探测*FKS2型*和*行动1*mRNA。（B）野生型对数期培养物（YPH499），*福克斯1*Δ（PGY5），以及*平方英尺*Δ（PGY220）细胞分裂并在23或39°C下孵育6小时。制备粗提取物，并按照材料和方法中所述测定GS活性。蛋白质；野生型；肌动蛋白，*行为1。*

图6
影响*英里/千卡1*上的突变*FKS2型*mRNA积累对生长温度升高的响应。细胞生长和温度变化如图4图例所示。总RNA，在指定时间从野生型（1788）或*英里/千卡1*突变体（DL1009）*FKS2型*和*行动1*mRNA。在温度变化前30分钟，通过向培养物中添加药物，使最终浓度达到0.2 mg/ml，用FK506对细胞进行预处理。野生型；肌动蛋白，*行为1。*

图7
转录因子RLM1对温度诱导的*FKS2型*野生型对数期培养物（1783年）和*rlm1型*在23°C下生长的Δ（GMY63-5D）细胞受到温度变化和FK506处理，如图4和图6的图例所示。在温度变化后的指定时间分离的总RNA被探测*FKS2型*和*行动1*mRNA。野生型；肌动蛋白，*行为1。*

图8
诱导*FKS2型*低碳源的表达和进入固定相与细胞完整性途径和钙调神经磷酸酶无关。（A）野生型（1788）和*bck1号机组*Δ（DL251）细胞在添加2%葡萄糖、2%半乳糖、2%甘油或2%醋酸钠的YEP中于23°C下生长至中对数期。检测总RNAFKS2型和*行动1*mRNA。的级别*FKS2型*mRNA的表达与在添加2%葡萄糖的YEP中生长的野生型相对。（B）文化*bck1型*Δ（DL251）和*中国广播公司1*Δ（MCY3-1D）及其等基因野生型菌株（分别为1788和YPH499）在含有2%葡萄糖的YEP中生长。总RNA，从对数期培养物中提取（log）（1.5×10⁷至3×10⁷细胞/ml）或固定相（STAT）（4.5×10⁸至6×10⁸细胞/ml），检测*FKS1（FKS1）*,*FKS2型*、和*行动1*mRNA。野生型；肌动蛋白，*行为1。*

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