Myosin heavy chain phosphorylation sites regulate myosin localization during cytokinesis in live cells

doi:10.1091/mbc.8.12.2605

.1997年12月；8(12):2605-15.

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肌球蛋白重链磷酸化位点调节活细胞胞质分裂期间肌球蛋白的定位

J H Sabry公司¹, S L摩尔, S瑞恩, J H臧, J A Spudich公司

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PMID： 9398679
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肌球蛋白重链磷酸化位点调节活细胞胞质分裂期间肌球蛋白的定位

J H Sabry公司等。分子生物学细胞. 1997年12月.

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.1997年12月；8(12):2605-15.

doi:10.1091/mbc.8.12.2605。

作者

J H Sabry公司¹, S L摩尔, S瑞恩, J H臧, J A Spudich公司

附属

¹美国加利福尼亚州斯坦福市斯坦福大学医学院生物化学系，邮编94305。

PMID： 9398679
预防性维修识别码：项目经理25731
内政部： 10.1091桶/8.12.2605桶

摘要

传统的肌球蛋白II在胞质分裂过程中发挥着基本作用，在胞质分裂过程中，它以双极粗丝的形式被认为是产生分裂细胞所需力的分子马达。在网柄菌中，粗丝的形成受肌球蛋白重链尾部三个苏氨酸残基的磷酸化调节。我们在这里报道了这种调节对胞质分裂活细胞中肌球蛋白定位的影响。我们对绿色荧光蛋白与野生型肌球蛋白和肌球蛋白的融合蛋白进行了成像，其中三种关键的苏氨酸已转变为丙氨酸或天冬氨酸。我们提供证据表明，粗丝的形成是卵裂沟中肌球蛋白积累所必需的，如果粗丝过度产生，这种积累会显著增强。这表明肌球蛋白在分裂细胞中的定位受到肌球蛋白重链磷酸化的调节。

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数字

图1
（A） GFP-肌球蛋白在肌球蛋白核中的表达*粘液菌*细胞。运行全细胞裂解物SDS-PAGE电泳。车道1，考马斯染色；抗肌球蛋白抗体；车道抗GFP抗体。两种抗体均鉴定出一条带，表明细胞中唯一的GFP标记蛋白是肌球蛋白。肌球蛋白印迹中的较轻条带是由二级抗体，不是肌球蛋白。（B）最小背景在肌球蛋白缺失的亲本细胞系中可见荧光。现场肌球蛋白-空细胞的成像与用于成像的曝光相同GFP-肌球蛋白相关细胞。左侧相位中显示的单元格具有只有最小的荧光，如右图所示。棒材，3μm。（C） GFP公司肌球蛋白在体内共定位。固定分裂的GFP-肌球蛋白细胞用抗肌球蛋白抗体染色。免疫荧光肌球蛋白的定位反映了GFP荧光的定位，这意味着荧光定位是GFP肌球蛋白的合理标记本地化。棒，10μm。

图2
GFP-肌球蛋白表达细胞部门。每个单元格的运行时间以秒为单位显示。重量，a表达GFP-肌球蛋白的细胞。请注意，肌球蛋白在中央积聚分裂沟形成前有丝分裂早期的细胞区域（35秒）。肌球蛋白在收缩的犁沟中被发现，在下面是一条带子质膜（135、200和235s）。细胞分离后，肌球蛋白定位于子细胞的后端相互迁移（275秒）。3XASP，一种表达GFP-3XASP-肌球蛋白。注意，在卵裂中很少有肌球蛋白积累沟壑（325和370秒）。3XALA，一种表达GFP-3XALA-肌球蛋白的细胞。GFP-3XALA-肌球蛋白从细胞（270和315秒），并在解理沟中显著累积（315秒）。棒材，5μm。

图3
肌球蛋白积累定量。平均值计算了指示区域内的荧光强度。（A）白色轮廓所示的四个区域是在早期有丝分裂时绘制的细胞的平均强度作为皮层的测量值肌球蛋白浓度。（B）在沟壑区定义犁沟的两个区域被用作皮层的测量沟纹肌球蛋白浓度，核周细胞质的一个区域用作细胞质肌球蛋白浓度的测量。棒材，5μm。（C）累积量显示为标准化的水平，如GFP-肌球蛋白细胞。实心条表示肌球蛋白的相对增加沟壑中与相邻细胞质的浓度如图4B：。条纹表明肌球蛋白相对增加沟壑中的浓度（B）与同一细胞的皮层早期有丝分裂如图4A所示。棒材，标准偏差。

图4
（A）切割速率的测定，核运动和细胞迁移。所示距离为在胞质分裂之前、期间和之后的不同时间测量。（B）所有三个距离都以严格的线性方式随时间变化。注释细胞迁移（循环）和核运动的速率（正方形）在胞质分裂期间（孵化时间之间）建立行）并在细胞分离后保持。

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