The yeast Cac1 protein is required for the stable inheritance of transcriptionally repressed chromatin at telomeres

doi:10.1073/pnas.94.24.13081

.1997年11月25日；94(24):13081-6.

doi:10.1073/pnas.94.24.13081。

酵母Cac1蛋白是端粒转录抑制染色质稳定遗传所必需的

E K蒙森¹, 德布鲁因, V A Zakian公司

附属公司

PMID： 9371803
预防性维修识别码： PMC24266型
内政部： 10.1073/pnas.94.24.13081

酵母Cac1蛋白是端粒转录抑制染色质稳定遗传所必需的

E K蒙森等。美国国家科学院程序. 1997.

.1997年11月25日；94(24):13081-6.

doi:10.1073/pnas.94.24.13081。

作者

E K蒙森¹, 德布鲁因, V A Zakian公司

附属

¹普林斯顿大学分子生物学系，美国新泽西州08544。

PMID： 9371803
预防性维修识别码： PMC24266型
内政部： 10.1073/pnas.94.24.13081

摘要

Cac1p是酵母染色质组装因子I（yCAF-I）的一个亚单位，被认为是将含有二乙酰化组蛋白的核小体组装到新复制的DNA上[Kaufman，P.D.，Kobayashi，R.&Stillman，B.（1997）Genes Dev.11，345-357]。尽管cac1δ细胞可以在端粒处建立并维持转录抑制，但它们表现出抑制状态的遗传性降低。单细胞分析显示，单个cac1δ细胞在每个细胞周期中从转录“关闭”切换到转录“打开”的频率高于野生型细胞。此外，cac1-delta细胞在C（1-3）A序列的内部通道附近的转录沉默是有缺陷的，但当通过逆转录PCR分析时，它们在沉默交配型基因座处的沉默没有显示出缺陷。尽管端粒和内部C（1-3）A束的转录沉默消失，但粒下DNA被组织成核小体，核小体具有沉默染色质的所有特征，例如组蛋白H4的低乙酰化和大肠杆菌dam甲基化酶的甲基化保护。因此，沉默染色质的这些特征不足以稳定维持沉默染色质状态。我们认为转录抑制状态的遗传需要yCAF-I介导的核小体组装所赋予的组蛋白乙酰化的特定模式。

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数字

图1
TPE减少*碳酸钙1*Δ单元。应变与*URA3公司*在染色体VII-L处，端粒在30°C下生长，并通过在FOA培养基上对每个菌株的两个独立菌落进行10倍系列稀释，以检测TPE。稀释液也放置在YC–Ura培养基上，以确定细胞总数。两个独立的镀层如所示上部和下部以说明通常观察到的*碳酸钙1*Δ单元。照片是在指定的天数后拍摄的。WT，野生型。

图4
*碳酸钙1*Δ细胞有效地抑制HMRa RT-PCR是使用从*材料α*菌株YPH500和YPH500碳酸钙1Δ（车道1和2），*MATa公司*菌株YPH499和YPH49九*碳酸钙1*Δ（3–6车道），以及aMATαsir1Δ应变（7–11车道）。两微克总RNA用于1-6道的反应。7–11道含有10倍系列稀释的来自*MATαsir1*Δ电池从第7车道的0.1μg开始到第11车道的0.00001μg。来自YPH500菌株的RNA，不表达*MATa1公司*，添加到通道7-11中的所有反应中，以便每个反应混合物中有1μg总核酸。显示了220-bp和298-bp标记的位置。R表示在逆转录之前用RNase处理RNA的反应。

图5
(A类)的地图*URA3公司*染色体VII-L端粒上的基因(*URA3-TEL公司*)在内部*尿酸3–52*轨迹（不按比例）。限制性内切酶裂解位点为巴姆高（B），*Hin公司*dIII（H），斯图本人（S）和生态RV（R）。阴影框表示斯图I–生态RV探针用于Southern杂交。(B类)*Hin公司*dIII型/巴姆端粒HI片段*URA3公司*（“保护带”）和*尿酸3–52*轨迹显示在左侧。这个*Hin公司*dIII型/巴姆HI/DpnI片段源自*URA3-TEL公司*（a）和*尿酸3–52*碎片（b）显示在右侧。

图2
端粒*ADE2型*基因在*碳酸钙1*Δ单元。使用颜色标记物、*ADE2型*基因，位于染色体V-R端粒（34）。将菌落接种在具有低腺嘌呤浓度（10毫克/升）的YC培养基上，使其在30°C下生长3天，然后在4°C下放置约3周，以使红色形成。

图3
哥伦比亚广播公司在年几乎被淘汰*碳酸钙1*Δ单元。野生型和*碳酸钙1*Δ含有1-kb内C区的菌株_1–3与*URA3公司*基因在*LYS2型*通过在FOA和YC-Ura平板上放置10倍系列稀释液的细胞，并在30°C下培养3或5天，对CBS位点（见顶部的地图）进行分析。

图6
的相对分数*URA3公司*乙酰化H4抗体免疫沉淀的DNA。来自菌株DdB10UT、DdB10 UT的染色质*碳酸钙1*Δ和DdB10UTsir3用多重乙酰化组蛋白H4特异性抗体免疫沉淀Δ。总数的分数*URA3公司*DNA免疫沉淀除以总DNA的分数*行动1*DNA或总DNA的分数*LEU2级*乙酰化组蛋白H4抗体免疫沉淀的DNA。这些值表示每个菌株三个独立免疫沉淀的平均值。标准偏差由误差条表示。

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