Neurotoxicity of the 22 kDa thrombin-cleavage fragment of apolipoprotein E and related synthetic peptides is receptor-mediated

doi:10.1523/JNEUROSCI.17-15-05678.1997

.1997年8月1日；17(15):5678-86.

doi:10.1523/JNEUROSCI.17-15-05678.1997。

载脂蛋白E 22kDa凝血酶裂解片段及相关合成肽的神经毒性是受体介导的

M托拉尔¹, M A品牌, J A和谐, K A Crutcher公司

附属公司

PMID： 9221767
PMCID公司： PMC6573216型
内政部： 10.1523/JNEUROSCI.17-15-05678.1997

载脂蛋白E 22kDa凝血酶裂解片段及相关合成肽的神经毒性是受体介导的

M托拉尔等。神经科学. 1997.

.1997年8月1日；17(15):5678-86.

doi:10.1523/JNEUROSCI.17-15-05678.1997。

作者

M托拉尔¹, M A品牌, J A和谐, K A Crutcher公司

附属

¹辛辛那提大学医学院神经外科，美国俄亥俄州辛辛那蒂45267。

PMID： 9221767
PMCID公司： PMC6573216型
内政部： 10.1523/JNEUROSCI.17-15-05678.1997

摘要

强效神经毒性与载脂蛋白E（apoE）相关的合成肽和载脂蛋白E的22kDa N-末端凝血酶切割片段有关。此外，22kDa片段的E4亚型的毒性明显高于E3亚型衍生的相同片段，这表明载脂蛋白E相关神经毒性可能在阿尔茨海默病的病理生理学中发挥直接作用。在本研究中，通过使用多种阻断载脂蛋白E的肝素结合和受体结合活性的药物，评估了细胞表面受体在介导神经毒性中的潜在作用。apoE肽和apoE片段的有效神经毒性抑制剂包括肝素、硫酸肝素、氯酸钠和肝素酶、低密度脂蛋白（LDL）受体相关蛋白受体相关蛋白和多克隆抗LDL受体相关蛋白抗体。这些结果表明，载脂蛋白E和相关肽的22kDa凝血酶裂解片段的神经毒性是受体介导的，最可能的候选受体是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖-LDL受体相关蛋白复合物。

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数字

**图1。**
肽E毒性的阻断_(141–149)²抗LRP抗体。相比较法显示组织培养中分离的鸡胚交感神经元(A类,C类,E类)或荧光显微镜(B类,D类,F类)用活性染料染色后。培养物在暴露于溶媒溶液20小时后拍照(A类,B类), 4 μ米E类_(141–149)²(C类,D类)或8μ米30μg/ml多克隆抗LRP抗体存在下的肽(E类,F类). 载体治疗未导致细胞死亡。然而，暴露于肽会导致细胞体肿胀(C类,箭头)、神经突串珠(C类,箭头)和广泛的细胞死亡(D类). 此时存活下来的少数细胞似乎肿胀了(D类,箭头). 抗LRP抗体保护细胞免受肽的毒性作用(E类,F类). 比例尺，100μm。

**图2。**
载脂蛋白E肽在鸡和大鼠神经细胞培养物中的剂量依赖性毒性作用。A类，培养的鸡交感神经细胞暴露于不断增加的肽E浓度中_(141–149)²，E_(141–155)²，或E_130–169持续20小时图表显示活性染料染色显示的存活细胞数量。肽的剂量-反应曲线显示，半数最大毒性浓度范围为1至4μ米.B类，暴露于肽E后，分离的鸡皮层神经元和大鼠海马神经元培养获得了类似的剂量-反应曲线_(141–149)²误差条表示平均值±SEM。

**图3。**
鸡交感神经细胞培养中载脂蛋白E肽诱导细胞死亡的时间进程。鸡交感神经元培养物暴露于4μ米肽E_(141–149)²最长24小时*线形图*显示活性染料染色显示的存活细胞数量。误差线表示平均值±SEM。

**图4。**
载脂蛋白E肽的肝素结合。肽与肝素-淀粉珠孵育，清洗，并按以下顺序加载到SDS-PAGE凝胶上：E_(141–155)²(*车道2*); E类_(141–149)²(*车道3*); E类_130–169(*车道4*); 来自apoE，E的C末端区域的控制肽_268–284(*车道5*); 和BSA(*车道6*). 考马斯蓝染色显示，在这些条件下，只有神经毒性的载脂蛋白E肽被回收。除了因该肽聚集而在通道3中出现的涂片外，在肽的预期分子量处还存在条带。分子量标记位于*车道1*和7.

**图5。**
HS阻断肽毒性。2.5μ的预培养（10分钟）米肽E_(141–149)²在加入鸡交感神经元培养物之前，随着HS浓度的增加，毒性被完全阻断。通过1μ米HS公司。误差线表示平均值±SEM。

**图6。**
氯酸钠和肝素酶阻断肽毒性。除培养基组外，本实验中的所有细胞均用20 m米氯酸钠。在没有肽的情况下，预培养对细胞活力没有任何影响。隔夜用氯酸钠预孵育，同时增加肝素酶浓度，可保护鸡交感神经元2μ米肽E_(141–149)²16 U/ml肝素酶具有统计学意义的保护作用。误差线表示平均值±SEM。

**图7。**
用RAP阻断肽毒性。在RAP、肽E浓度增加的情况下预培养1小时后_(141–149)²(A类)和E_130–169(B类)以2和4μ米分别为。20小时后，活性染料染色显示100 n米RAP完全阻断了肽的毒性。误差线表示平均值±SEM。

**图8。**
用抗LRP抗体阻断肽毒性。用30μg/ml多克隆抗LRP或单克隆抗apoA1抗体预先孵育鸡交感神经元2小时，然后用2μg/ml肽E处理_(141–149)²神经细胞培养物的活性染料染色显示，只有用抗LRP抗体预处理过的培养物才能免受肽毒性的影响。误差线表示平均值±SEM。

**图9。**
用RAP和抗LRP阻断载脂蛋白E 22kDa片段的毒性。鸡交感神经细胞的分离培养物用1μ米RAP或30μg/ml多克隆抗LRP抗体分别作用1小时和2小时。预培养后，培养物暴露于250 n米22 kDa凝血酶裂解apoE4片段20小时，然后用活性染料染色。这两种药剂都能显著保护细胞免受22kDa片段的毒性。误差线表示平均值±SEM。

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1. Christie RH，Freeman M，Hyman BT。巨噬细胞清道夫受体（一种多功能脂蛋白受体）在阿尔茨海默病中与老年斑块相关的小胶质细胞中的表达。《美国病理学杂志》。1996;148:399–403.-项目管理咨询公司-公共医学

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