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1997年7月18日;272(29):18382-90.
doi:10.1074/jbc.272.29.18382。

保守羧基末端疏水基序的磷酸化调节蛋白激酶C的催化和调节域

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保守羧基末端疏水基序的磷酸化调节蛋白激酶C的催化和调节域

A S爱德华兹等。 生物化学杂志
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摘要

成熟蛋白激酶C在一个保守的羧基末端基序处磷酸化,该基序包含由两个疏水残基包围的Ser(或Thr);在蛋白激酶CβII中,该残基为Ser-660(Keranen,L.M.、Dutil,E.M.和Newton,A.C.(1995)Curr。生物学5,1394-1403)。这一贡献研究了该位置的负电荷如何调节蛋白激酶C的功能。具体而言,蛋白激酶CβII中的Ser-660突变为Ala或Glu,以及酶的稳定性、膜相互作用、Ca2+调节、,并与660残基磷酸化的野生型蛋白的动力学参数进行了比较。该位置的负电荷对酶的二酰甘油刺激的膜相互作用和伴随膜结合的构象变化没有显著影响。相反,磷酸盐使酶对Ca2+的亲和力增加了10倍,对磷脂酰丝氨酸的亲和力也相应增加,这两种相互作用是由C2结构域介导的。负电荷也增加了蛋白质的热稳定性,降低了其ATP和肽底物的Km。这些数据表明,蛋白激酶C最末端羧基末端的磷酸化构建了活性位点,使其以更高的亲和力结合ATP和底物,并在调控区域中构建了决定簇,从而实现了更高的Ca2+亲和力结合。蛋白激酶CβII中围绕Ser-660的基序存在于许多其他激酶中,表明羧基末端磷酸化促进的相互作用可能提供了稳定激酶结构的一般机制。

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