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.1997年4月1日;323(第1部分)(第一部分):159-65。
doi:10.1042/bj3230159。

牛内皮一氧化氮合酶作为一种具有下调的非偶联NADPH氧化酶活性的同源二聚体的表征:四氢生物蝶呤结合动力学和血红素在二聚化中的作用

附属公司

牛内皮型一氧化氮合酶是一种具有下调的非偶联NADPH氧化酶活性的同型二聚体:四氢生物蝶呤结合动力学和血红素在二聚体中的作用

B M列表等人。 生物化学杂志. .

摘要

从杆状病毒过表达系统中纯化了脂肪酰化缺陷牛内皮一氧化氮合酶(eNOS)突变体(Gly-2到Ala-2,G2AeNOS。纯化蛋白可溶且活性高(0.2-0.7微摩尔l-瓜氨酸.mg-1.min-1),含0。每亚单位血红素的77+/-0.01当量,在396 nm处显示出Soret最大值,并且在缺乏左旋精氨酸或四氢生物蝶呤的情况下,NADPH氧化仅出现轻微解偶联。放射性配体结合研究显示,在不存在和存在0.1mM l-精氨酸的情况下,四氢生物蝶呤的特异性结合的KD值分别为147+/-24.1 nM和52+/-9.2 nM。左旋精氨酸的积极协同作用是由于四氢生物蝶呤解离速率显著降低(从1.6+/-0.5降至0。3+/-0.1 min-1)。低温SDS凝胶电泳显示,约80%的蛋白质在与l-精氨酸和四氢生物蝶呤预孵育后以含血红素二聚体的形式迁移。凝胶过滤色谱产生一个Stokes半径为6.8+/-0.04 nm的峰,对应的流体动力体积为1。32x10(-24)m3,而血红素缺乏制剂(每亚单位约0.3当量)含有额外的蛋白质物种,其流体动力学半径为5.1+/-0.2 nm,相应体积为0.55x10(-25)m3,表明血红素可用性调节eNOS二聚体。

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