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.1996年10月;135(1):37-51.
doi:10.1083/jcb.135.1.37。

ERM(ezrin/radidin/moesin)蛋白/质膜结合的调节机制:磷脂酰肌醇周转和Rho依赖性信号通路的可能参与

附属公司

ERM(ezrin/radidin/moesin)蛋白/质膜结合的调节机制:磷脂酰肌醇周转和Rho依赖性信号通路的可能参与

M Hirao先生等。 J细胞生物学. 1996年10月.

摘要

ERM蛋白(ezrin、radixin和moesin)作为交联剂参与肌动蛋白丝/质膜的相互作用。CD44已被确定为ERM蛋白的主要膜结合伙伴之一。为了检测CD44/ERM蛋白在体外的相互作用,我们通过重组杆状病毒感染的方法制备了小鼠ezrin、radidin、moesin和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)/CD44细胞质域融合蛋白(GST-CD44cyt),并构建了ERM蛋白与CD44细胞质结构域结合的体外检测方法。在这个系统中,ERM蛋白以低离子强度与GST-CD44cyt结合,亲和力高(moesin的Kd为9.3+/-1.6nM),但在生理离子强度下亲和力低。然而,在存在磷脂肌醇(磷脂酰肌醇[PI],磷脂酰肌糖醇4-单磷酸[4-PIP],磷脂酰基肌醇4.5-二磷酸[4,5-PIP2])的情况下,ERM蛋白与GST-CD44cyt结合,即使在生理离子强度下也具有相对高的亲和力:4,5-PIP2显示出显著的效果(在4,5-PIP2存在下,moesin的Kd为9.3+/-4.8nM)。接下来,为了研究体内CD44/ERM相互作用的调节机制,我们重新检查了BHK细胞的免疫沉淀CD44/ERP复合物,发现其含有Rho-GDP解离抑制剂(GDI),即Rho-GTPase的调节器。然后我们评估了Rho在CD44/ERM复合物形成的调节中的作用。当添加重组ERM蛋白并与培养的BHK细胞的裂解物孵育,然后离心,重组ERM蛋白质的一部分在不溶性部分中回收。GTPγS增强了这种结合,C3毒素(Rho的一种特异性抑制剂)显著抑制了这种结合。这表明,这种结合需要裂解液中的GTP形式的Rho。CD44细胞质结构域特异性mAb也显著抑制了这种结合,将不溶性部分中外源性ERM蛋白的大多数结合伴侣鉴定为CD44。与此结合分析一致,在用C3毒素处理过的活BHK细胞中,大多数不溶性ERM蛋白移动到细胞质中的可溶性隔室,使CD44远离ERM。这些发现表明,Rho调节体内CD44/ERM复合物的形成,磷脂酰肌醇的转换可能参与了这种调节机制。

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引用人

工具书类

    1. 细胞生物学杂志。1994年7月;126(2):391-401-公共医学
    1. 齐戈特。1993年11月;1(4):325-31-公共医学
    1. 细胞生物学杂志。1995年5月;129(4):1007-22-公共医学
    1. 分子生物学细胞。1995年3月;6(3):247-59-公共医学
    1. 致癌物。1995年7月6日;11(1):39-48-公共医学

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