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1996年5月17日;271(20):11710-7.
doi:10.1074/jbc.271.20.11710。

InaD基因产物的磷酸化,这是恢复视觉兴奋所需的感光细胞膜蛋白

附属公司
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InaD基因产物的磷酸化,这是恢复视觉兴奋所需的感光细胞膜蛋白

A Huber公司等。 生物化学杂志
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摘要

在一种使用磷脂酰肌醇信号通路分离和表征光感受器中转导级联关键蛋白的方法中,我们分离了果蝇InaD基因产物的Calliphora同源物,该基因产物在果蝇Ina D突变体中导致光反应缓慢失活。通过用针对感光细胞膜蛋白的抗体筛选视网膜cDNA文库,我们分离出编码665个氨基酸残基的cDNA(Mr=73349)。该序列与果蝇InaD基因产物的同源性为65.3%(相似性为77.3%)。使用针对由氨基酸272-542(抗InaD-(272-541))或氨基酸643-655(抗Ina D-(643-656))组成的肽的单特异性抗体探测Western blot)InaD基因产物的研究表明,Calliphora InaD蛋白与信号转导的杆状体光感受器膜特异性相关,可通过含有1.5 M NaCl的高盐缓冲液从中提取。由于八分之五的蛋白激酶C磷酸化共识序列位于果蝇和丽蝇InaD蛋白中相同的10-16个氨基酸的延伸范围内,因此InaD基因产物可能是蛋白激酶C的靶点。用分离的横纹肌体光感受器膜进行磷酸化研究,然后进行InaD免疫沉淀,结果表明InaD蛋白是一种磷酸蛋白。体外磷酸化至少在一定程度上是Ca2+依赖性的,并被佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯激活。inaC编码的眼睛特异性形式的蛋白激酶C(眼睛PKC)由来自横纹肌体感光细胞膜的洗涤剂提取物的针对InaD蛋白的特异性抗体共同沉淀,这表明InaD蛋白和眼睛PKC在这些膜中相互作用。与InaD蛋白和eye-PKC共沉淀是转导途径的另外两个关键组成部分,即trp蛋白(被提议形成Ca2+通道)和norpA-编码磷脂酶C(转导途径主要靶酶)。有人提出,视觉刺激引起的细胞内Ca2+浓度升高会通过眼-PKC启动InaD蛋白的磷酸化,从而调节其在控制光反应中的功能。

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