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比较研究
1995年3月;12(3):166-76.
doi:10.1002/mc.2940120308。

表型酵母试验检测体内差异蛋白激酶C配体调节

附属公司
比较研究

表型酵母试验检测体内差异蛋白激酶C配体调节

H L谢赫等。 摩尔癌 1995年3月

摘要

蛋白激酶C(PKC)作用的分子解剖部分基于耗时的功能分析,例如用于测试佛波酯和相关PKC活化剂的肿瘤启动子活性的小鼠皮肤模型。为了帮助克服此类检测的复杂性带来的限制,我们开发了酵母酿酒酵母作为一种替代性、快速和简单的实验系统。该模型具有特定的表型,即细胞加倍时间的增加,这与表达的哺乳动物PKC亚型的酶活性水平成正比。我们利用这一表型来检测和比较体内两种二萜类化合物,即佛波酯佛波醇-12-氨基丁酸-13-乙酸酯(PMA)和甲泽兰,以及吲哚生物碱吲哚内酰胺V对天然牛PKCα和保守调控区C1突变体的调控。我们发现,PMA激活的PKC突变体缺乏保守区C1的富Cys锌指状重复序列,其水平相对降低,而吲哚内酰胺V激活的是天然PKCα,但在正常剂量下没有任何突变体。相反,mezerein激活了天然PKCα和一个缺乏第二个Cys重复序列的突变体,但缺乏C1的第一个Cys的突变体重复序列的水平大大降低。体外观察到的PKC催化活性支持了这些差异反应。因此,PMA通过任一Cys重复序列调节PKCα活性相对较好,而mezerein调节主要通过C1的第一个Cys重复序列发生。吲哚内酰胺V的活化作用较弱,在没有Cys重复序列的情况下,其活性大大降低,并且没有表现出偏好性。我们将此表型分析作为一种快速通用的筛选,用于筛选候选药物的PKC激活或可能的抑制潜力,并确定参与这些相互作用的PKC调控位点。

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