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.1995年1月20日;270(3):1230-7.
doi:10.1074/jbc.270.3.1230。

低氧诱导因子1的纯化和表征

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低氧诱导因子1的纯化和表征

G L Wang公司等。 生物化学杂志. .
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摘要

低氧诱导因子1(HIF-1)是一种DNA结合蛋白,可激活缺氧或氯化钴处理Hep3B细胞中的促红细胞生成素(Epo)基因转录。HIF-1 DNA结合活性也由缺氧或钴在非Epo产生细胞中诱导,这表明HIF-1在缺氧信号转导和转录调控中的一般作用。在这里,我们报道了从产生Epo的Hep3B细胞和非产生Epo-的HeLa S3细胞中生化纯化HIF-1。HIF-1蛋白经DEAE离子交换和DNA亲和层析纯化11250倍。对从制备性凝胶位移分析中分离出的HIF-1进行分析,发现四种多肽。这些HIF-1组分的肽图谱显示,91-kDa、93-kDa-和94-kDa/多肽具有相似的胰蛋白酶图谱,而120-kDa/kDa多肽具有不同的图谱。甘油梯度沉淀分析表明,HIF-1主要以异二聚体形式存在,在较小程度上以异四聚体的形式存在。部分纯化的HIF-1与EPO增强子的野生型HIF-1结合位点特异结合,但不与缺乏低氧诱导增强子活性的突变序列结合。纯化HIF-1的紫外交联分析表明,HIF-1两个亚单位直接与DNA接触。我们得出结论,在氯化钴处理的HeLa细胞和缺氧Hep3B细胞中,HIF-1由两个不同的亚单位组成:120-kDa HIF-1α和91-94-kDa HIF-1β。

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