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.1995年4月6日;10(7):1283-90.

确定c-Raf-1和Ras-GTP之间的相互作用位点

附属公司
  • PMID: 7731678

确定c-Raf-1和Ras-GTP之间的相互作用位点

D巴纳德等。 癌基因. .

摘要

通过接触表位扫描和定点突变,在c-Raf-1的51-149区域确定了蛋白质相互作用的特定位点。基于c-Raf-1的Ras结合域的一级序列的19个重叠肽被测试了竞争性抑制Ras-GTP和c-Raf-1N末端之间复合物形成的能力。含有c-Raf-1残基91-105的肽以及覆盖从残基118-143延伸的区域的五个重叠肽干扰Ras结合,将这些位点定义为与Ras的潜在接触表面。丙氨酸扫描突变被用作Ras与c-Raf-1 N末端相互作用位点的第二探针。Raf残基64-67和80-103被证明对与Ras-GTP的关联很重要,残基66、67、84、87、89和91被确定为与Ras蛋白最关键的单个接触点。118-143之间的丙氨酸残基取代表明只有一个潜在的弱相互作用位点由残基120-125定义。肽和诱变分析的综合结果表明,c-Raf-1与Ras相互作用的一级位点定位于Raf残基80-103,二级相互作用发生于残基66和67,可能发生于120-125。Ras效应区的接触表位扫描发现,Ras/Raf与对应于Ras氨基酸37-51的肽的结合受到最大抑制。提出了Ras和Raf依赖GTP的关联模型。

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