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.1995年10月;220(2):304-11.
doi:10.1006/excr.1995.1320。

染色质组装因子1(CAF-1)与HeLa细胞核中的复制灶共定位

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染色质组装因子1(CAF-1)与HeLa细胞核中的复制灶共定位

T克鲁德. 实验细胞研究. 1995年10月.

摘要

在真核细胞周期的S期,新复制的DNA被组装成染色质。我使用间接免疫荧光显微镜来定位DNA复制的染色质组装位点。通过掺入生物素16-dUTP标记渗透性HeLa细胞细胞核中的复制灶,并用荧光链霉亲和素检测。用溴脱氧尿苷对体内复制灶进行预标记表明,在渗透性细胞中的复制在预先存在的复制叉处进行。用亚单位特异性单克隆抗体测定染色质组装因子1(CAF-1)的定位。CAF-1在有丝分裂细胞中不可检测,并且仅在约60%的所有间期细胞核中在背景水平下可检测。其他间期细胞核显示CAF-1的强点状免疫染色。在S期的所有阶段,CAF-1的这些位点与复制病灶共定位。未观察到CAF-1的其他离散位点。人类复制蛋白A(RPA)与这些复制/染色质组装位点共定位。此外,观察到RPA的额外核位点可能代表复制前病灶,准备启动DNA复制。

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