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.1985年2月25日;260(4):2245-52.

来自兔肝脏的C1四氢叶酸合成酶。酶及其两个结构域的结构和动力学性质

  • PMID: 3871768
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兔肝C1-四氢叶酸合酶。酶及其两个结构域的结构和动力学性质

E维拉尔等。 生物化学杂志. .
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摘要

C1-四氢叶酸合成酶是一种多功能酶,催化1-碳代谢中的三个反应:10-甲酰四氢叶酸酯合成酶;5,10-甲基四氢叶酸环水解酶;5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶。开发了一种快速的1天纯化程序,从10只兔子肝脏中提取40毫克纯酶。这种三功能酶的10-甲酰四氢叶酸合成酶活性比以前从兔子肝脏纯化的酶高4倍。已开发出快速分离含有亚甲基四氢叶酸脱氢酶和亚甲基四氢叶酸环水解酶活性的酶的胰蛋白酶片段的条件。该片段是一个单体,在大多数缓冲液中显示出36000的亚单位和天然分子量。然而,在磷酸盐缓冲液中,天然分子量表明片段是二聚体。还提供了条件,使糜蛋白酶消化能够从天然酶中同时分离出含有10-甲酰四氢叶酸合成酶活性的大片段和含有脱氢酶和环水解酶活性的小片段。大片段是一个亚单位分子量为66000的二聚体。小片段保留了天然酶的所有脱氢酶和环水解酶活性。大片段不稳定,但保留了大部分10-甲酰四氢叶酸合成酶活性。两个片段的底物Km值与天然酶的Km值相同。天然酶的10-甲酰四氢叶酸合成酶活性需要铵或钾离子来表达完全催化活性。这两种离子对大糜蛋白酶片段催化活性的影响与天然酶相同。我们通过差示扫描量热法表明,天然酶包含两个蛋白质结构域,在47和60℃下出现热转变。证据表明,这两个结构域与天然酶蛋白水解产生的两个蛋白质片段有关。两个结构域中较大的结构域包含10-甲酰四氢叶酸合成酶活性的活性位点,而较小的结构域则包含催化脱氢酶和环水解酶反应的活性位点。用铵离子或钾离子替换钠离子缓冲液会增加天然酶大区域的稳定性。这种稳定性的改变并不伴随着酶的四级结构的改变。(摘要删减为400字)

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