LncRNA NEAT1 facilitates pancreatic cancer growth and metastasis through stabilizing ELF3 mRNA

.2020年1月1日；10(1):237-248.

eCollection 2020。

LncRNA NEAT1通过稳定ELF3 mRNA促进胰腺癌生长和转移

冯亚光¹, 凌高¹, 崔广飞¹, 严操¹

附属公司

PMID： 32064164
预防性维修识别码： PMC7017733号

LncRNA NEAT1通过稳定ELF3 mRNA促进胰腺癌生长和转移

冯亚光等。美国癌症研究杂志. 2020.

.2020年1月1日；10(1):237-248.

eCollection 2020。

作者

冯亚光¹, 凌高¹, 崔广飞¹, 严操¹

附属

¹中国河南省商丘市第一人民医院消化与肝胆外科476000。

PMID： 32064164
预防性维修识别码： PMC7017733号

摘要

最近，越来越多的证据表明，长非编码RNA（lncRNAs）在多种癌症的发病机制中发挥着重要作用。尽管已报道lncRNA富含核的丰富转录物1（NEAT1）在某些癌症中的致癌作用，但NEAT1在胰腺癌（PC）进展中的功能意义和分子机制尚不清楚。在这项研究中，我们的发现表明，在PC组织和细胞系中NEAT1表达上调；NEAT1高表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结和远处转移有关，也预示着预后不良。功能实验表明，NEAT1在体内外均能促进PC细胞增殖和转移。从机制上讲，NEAT1可以与E74样ETS转录因子3（ELF3）mRNA结合，增强胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1（IGF2BP1）和ELF3 mRNA的结合，从而抑制ELF3的mRNA降解，我们的研究表明，NEAT1可能是PC患者的潜在治疗靶点。

关键词：IGF2BP1；入侵；mRNA稳定性；进展。

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没有。

数字

图1
NEAT1在PC组织和细胞系中过度表达，与预后不良相关。A.通过qRT-PCR测定60对PC和匹配的相邻正常胰腺组织中NEAT1的表达水平。B.通过qRT-PCR评估NEAT1在正常人胰腺细胞系HPDE6-C7和6个PC细胞系PANC-1、BxPC-1、BxPC-3、AsPC-1、PaCa-2和SW1990中的表达。根据PC组织中NEAT1表达的中位数，将PC患者分为高水平组（n=30）和低水平组（n=30）。采用Kaplan-Meier方法和log-rank检验评价NEAT1表达与PC患者总生存时间的关系。

图2
NEAT1促进PC细胞体外增殖、迁移和侵袭。A.用含有NEAT1 shRNA（shNEAT1）或阴性对照shRNA（sh NC）的慢病毒载体转染PANC-1和BxPC-1细胞，用qRT-PCR检测NEAT1的表达。B.用含有NEAT1或阴性对照载体（NC）的慢病毒载体转染PaCa-2和SW1990细胞，并用qRT-PCR检测NEAT1的表达。C.用CCK-8法检测对照组和NEAT1缺失的PANC-1和BxPC-1细胞的增殖。D.通过CCK-8分析检测对照细胞和NEAT1过度表达的PaCa-2和SW1990细胞的增殖。E.通过跨阱分析检测对照组和NEAT1缺失的PANC-1和BxPC-1细胞的细胞迁移和侵袭。F.通过transwell测定检测对照和NEAT1过表达的PaCa-2和SW1990细胞的细胞迁移和侵袭。

图3
体内NEAT1表达缺失抑制PC生长和转移。（A）来自NEAT1沉默的PANC-1细胞的异种移植瘤。在指定的时间测量来源于对照和NEAT1耗竭的PANC-1细胞的异种移植物肿瘤的体积。（B）测量（A）的肿瘤重量。（C）注射对照组和NEAT1缺失的PANC-1细胞的小鼠肺转移的典型图像（左）。计算每只小鼠的肺转移数（右）。

图4
NEAT1与ELF3 mRNA相互作用并增加其稳定性。A.采用MS2-RIP法检测NEAT1对PANC-1和PaCa-2细胞中ELF3 mRNA的抑制量。IgG作为阴性对照。B.PANC-1和PaCa-2细胞裂解物与生物素标记的NEAT1孵育；下拉后，用qRT-PCR测定ELF3 mRNA。C.对照组和NEAT1缺失的PANC-1和BxPC-1细胞中ELF3蛋白水平的Western blot分析。D.对照组和NEAT1缺失的PANC-1和BxPC-1细胞中ELF3 mRNA水平的qRT-PCR分析。E.对照组和NEAT1过度表达的PaCa-2和SW1990细胞中ELF3蛋白水平的Western blot分析。F.对照组和NEAT1过度表达的PaCa-2和SW1990细胞中ELF3 mRNA水平的qRT-PCR分析。G.对照组和NEAT1缺失的PANC-1细胞用α-阿曼替丁（50 mM）处理以阻止新RNA合成。测定ELF3 mRNA的降解。H.对照组和NEAT1-过度表达的PaCa-2细胞用α-阿曼替丁（50 mM）处理以阻止新的RNA合成。测定ELF3 mRNA的降解。I.对照组和NEAT1缺失的PANC-1和BxPC-1细胞中ELF3启动子的荧光素酶活性分析。J.对照组和NEAT1过度表达的PaCa-2和SW1990细胞中ELF3启动子的荧光素酶活性分析。K.用qRT-PCR法测定60对胰腺癌和匹配的邻近正常胰腺组织中ELF3 mRNA的表达水平。L.PC组织中NEAT1和ELF3 mRNA水平之间的Pearson相关性分析。

图5
NEAT1通过与IGF2BP1结合抑制ELF3 mRNA的降解。A.将生物素化的NEAT1或反义RNA与PANC-1细胞提取物孵育，并通过western blot检测相关的IGF2BP1。在PANC-1和PaCa-2细胞中用IgG或IGF2BP1抗体进行B.RIP检测，然后用qRT-PCR检测下拉NEAT1。在NEAT1缺失的PANC-1和BxPC-1细胞中使用IgG或IGF2BP1抗体进行C.RIP分析，然后通过qRT-PCR检测下拉ELF3 mRNA。用IgG或IGF2BP1抗体对NEAT1过度表达的PaCa-2和SW1990细胞进行D.RIP分析，然后用qRT-PCR检测ELF3 mRNA的下拉。E.将IGF2BP1 shRNA转染到NEAT1过表达的PaCa-2和SW1990细胞中，然后通过qRT-PCR评估ELF3 mRNA水平。F.将IGF2BP1 shRNA转染到NEAT1过度表达的PaCa-2和SW1990细胞中，然后测量ELF3的稳定性。

图6
NEAT1部分通过ELF3发挥致癌作用。A.用含有ELF3 shRNA（shELF3）或阴性对照shRNA（shNC）的慢病毒载体转染PANC-1和BxPC-1细胞，并通过qRT-PCR检测ELF3的表达。B.用CCK-8法检测对照组和ELF3缺失的PANC-1和BxPC-1细胞的增殖。C、采用跨阱法检测对照组和ELF3缺失的PANC-1和BxPC-1细胞的迁移和侵袭。将ELF3 shRNA转染到NEAT1过度表达的PaCa-2和SW1990细胞中，然后通过qRT-PCR评估ELF3 mRNA水平。ELF3基因敲除部分阻断了NEAT1介导的对PaCa-2和SW1990细胞增殖的促进作用。F.ELF3基因敲除部分阻断了NEAT1介导的PaCa-2和SW1990细胞迁移和侵袭的促进作用。

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