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.1989年2月;108(2):553-67.
doi:10.1083/jcb.108.2.553。

Y-1肾上腺细胞骨架蛋白激酶C的分离与鉴定

附属公司

Y-1肾上腺细胞骨架蛋白激酶C的分离与鉴定

V帕帕佐普洛斯等。 J细胞生物学. 1989年2月.

摘要

Y-1小鼠肾上腺肿瘤细胞的细胞骨架含有一种钙和磷脂依赖性蛋白激酶(蛋白激酶C),其结合足够紧密,能够抵抗0.5%Triton而非1.0%Triton的提取。酶已从细胞骨架和细胞溶质中纯化到接近同质性。它显示了这种激酶的典型特征,即对Ca2+和磷脂的需求,由肿瘤促进剂而非非促肿瘤佛波酯刺激,以及由三氟拉嗪抑制。该酶对细胞骨架中的四种底物(即80、33、20和18 kD)具有特异性。前三种底物被酶磷酸化;第四种是去磷酸化的,因此受到激酶的间接影响。80-kD蛋白是在体外和细胞骨架中自我磷酸化的激酶本身。20-kD蛋白是肌球蛋白轻链。33-kD和18-kD蛋白尚未确定。当Y-1细胞被洋地黄素渗透并与[gamma-32P]ATP和佛波醇-12-吡啶-13-乙酸酯孵育时,相同的底物被磷酸化。当将部分纯化的蛋白激酶C添加到先前提取的细胞骨架中以去除内源性蛋白激酶C时,相同底物的磷酸化程度会发生改变,将这三种试剂加上蛋白激酶C添加到提取的细胞骨架中,使这些结构经历快速而广泛的四舍五入。通过添加佛波酯,在完整的细胞中也会引起类似的变化。结论是,蛋白激酶C能够通过涉及肌球蛋白轻链的自磷酸化和磷酸化的作用改变肾上腺细胞的形状。这种反应又可能与对ACTH和环AMP的类固醇生成反应有关。

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    1. 生物化学杂志。1982年11月25日;257(22):13341-8-公共医学
    1. 生物化学杂志。1977年2月10日;252(3):1102-6-公共医学
    1. 美国国家科学院院刊,1983年1月;80(1):36-40-公共医学
    1. 自然。1983年2月17日至23日;301(5901):621-3-公共医学
    1. 《生物化学杂志》1983年8月15日;214(2):569-74-公共医学

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