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.2017年8月24日；170（5）：956-972.e23。
doi:10.1016/j.cell.2017.07.038。

DNA交叉桥接形成一组有丝分裂染色体的单个细胞核

马蒂亚斯·桑威尔 1, 马克西米利安·施耐德 1, 鲁道夫·霍夫勒 1, 菲利普·施马尔霍斯特 2, 朱利安·朱德 三, 约翰内斯·祖伯 三, 丹尼尔·W·格里希 4
附属公司

DNA交叉桥接形成一组有丝分裂染色体的单个细胞核

马蒂亚斯·桑威尔等。 单元格. .

摘要

真核细胞将染色体储存在单个细胞核中。这对保持基因组的完整性很重要，因为染色体被包装成单独的细胞核（微核）很容易导致大规模DNA损伤。在有丝分裂期间，高等真核生物分解细胞核，释放个体化染色体进行分离。有多少染色体随后改造成单个细胞核尚不清楚。利用基于图像的人类细胞筛选，我们确定屏障-自动整合因子（BAF）是引导细胞膜形成单个细胞核的关键因素。出乎意料的是，核组装不需要BAF与内膜蛋白的结合，而是依赖于BAF桥接远处DNA位点的能力。活细胞成像和体外重建显示，BAF在有丝分裂染色体集合周围富集，诱导形成致密的跨桥染色质层，该染色质层具有机械刚性，并将膜限制在表面。我们的研究表明，BAF介导的染色体力学变化是核组装的基础，对正确的基因组功能具有广泛的意义。

关键词：BAF；DNA交叉桥接；屏障-自动积分因子；染色体；显色菌；微核；有丝分裂；核组装；核膜。

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数字

无
图形摘要
图S1
图S1
与图1（A–C）相关的纺锤扰动和微核表型，稳定表达H2B-mCherry和Tubulin-EGFP的活HeLa细胞在（A）未扰动条件下，（B）在200 ng/ml诺卡唑存在下或（C）在500 nM紫杉醇存在下成像。（D） 在添加500 nM紫杉醇和320 nM逆转酶20小时后，对稳定表达H2B–mCherry和核导入底物IBB-EGFP的活细胞进行成像。（E） 稳定表达H2B–mCherry和Lamin B-EGFP的活细胞在500 nM紫杉醇和320 nM逆转剂存在下的时间推移图像。在这种情况下，有丝分裂退出时形成的一些微核随着时间的推移而崩溃（以黄色箭头标记）。比例尺为10μm。
图1
图1
一种纺锤体独立机制从一组个体化有丝分裂染色体（A）中形成一个单核。在没有或存在诺可唑和逆转的情况下，对HeLa活细胞进行成像。本研究中使用的所有细胞系均稳定表达标记蛋白（如H2B-mCherry和Lap2β-EGFP）。（B和C）活细胞成像（B），每个有丝分裂后细胞的细胞核数量量化（C）（条形图表示平均值±SD，n=114个细胞）。（D） 如（A）所示，在紫杉醇和reversine的存在下对活HeLa细胞进行成像。（E和F）对中的活细胞进行成像（E），并量化每个有丝分裂后细胞的细胞核数（F）（条形图表示平均值±SD，n=243）。比例尺，10μm。另请参见图S1和电影S1和S2。
图2
图2
RNAi筛选将BAF确定为形成单核（a–C）的关键因素RNAi筛查，以确定自旋相关的核组装因子。（A） 实验设计和假设表型。（B） 靶向1295个基因的RNAi筛选；数据点显示了根据监督机器学习分类的每siRNA微核细胞的分数。蓝色表示非靶向控制siRNA。（C） 来自屏幕的原始数据。在siRNA-介导的敲除后以及添加诺卡唑和逆转剂后立即（0小时）或22小时对HeLa细胞进行成像。siRNA转染后96小时（除非另有说明，否则96小时用于所有IF）细胞的（D和E）免疫荧光（IF），并对（D）层粘连蛋白B或（E）含FG重复的核孔蛋白进行染色（用mAb414）。显示了一个共焦截面。（F–H）超分辨率显微镜三维分析BAF缺失细胞的核形态。（F） 细胞单层光学切片，免疫荧光染色层压板B和CREST（动粒细胞），手工追踪层压板和DNA信号进行3D重建。未检测到与主核（灰色）连接的微核显示为黄色。（G） 通过超分辨率显微镜和3D重建判断微核量化（条形图表示平均值±SD，n=67个细胞）。（H） 每个微核的CREST-foci（条形表示平均值±SD，n=37微核）。（I–K）核碎裂分析。（一） 在siRNA转染后96小时，对稳定表达核导入底物IBB-EGFP的活细胞进行成像，并（J）分析IBB-EGF的核质浓度比（点表示单个细胞，线表示中位数和四分位数范围，n=430[siControl]，n=472[siBAF]）。STAR方法中详细介绍了所有数据的显著性定义和基本统计检验信息。（K） 如（I，箭头）所示，单个核碎片内显示出可变IBB-EGFP浓度的BAF缺失细胞被归类为微核细胞（条形图表示平均值±SD，n=437[siBAF]和n=468[siControl]细胞）。比例尺，10μm。另请参见图S2和表S1。
图S2
图S2
siRNA转染后96小时野生型HeLa细胞BAF的RNAi表型验证，与图2（A）相关。DNA用Hoechst 33342染色（显示了两个独立实验的代表性图像）。（B） 人工分割细胞中BAF水平的量化，如（A）所示。线表示中位数和四分位间距，每种情况n＝10个细胞，∗∗∗∗经双尾t检验，p<0.0001。（C） siRNA转染后90小时，对稳定表达H2B–mCherry和Lamin B-EGFP的HeLa细胞进行成像。显示了一个共焦截面。（D） 核形态表型的量化（来自两个独立实验的n=171（siBAF#1）、n=302（siBAF#2）、n=181（siBAF1#3）和n=186（siControl）细胞）。线条表示平均值。（E） 基于CRISPR/Cas9的DNA链缺口策略的示意图，用于从3′UTR的一个等位基因中移除siBAF#2结合位点BAF1公司基因组位点。上部面板显示（C，D）中使用的siRNA的基因组结合位点。下部面板显示单导向RNA（sgRNA）结合位点和基因组缺口位点（红色箭头）。（F） 基因组编辑后的HeLa细胞克隆测序结果显示sgRNAs诱导的缺失，如（E）所示。其中一个等位基因缺少siBAF#2结合位点（抗性等位基因），而另一个等位点仍然是野生型。（G） siRNA转染96小时后HeLa野生型细胞和siBAF#2耐药细胞中BAF和肌动蛋白的免疫印迹分析。（H） siRNA转染96小时后，对野生型HeLa细胞和siBAF#2耐药细胞的Lamin B进行免疫荧光染色。显示了一个共焦截面。DNA用Hoechst 33342染色。（一） 通过监督机器学习，将（H）中所示的细胞自动分类为正常或微核形态（条形图表示平均值±标准差。，∗∗∗p<0.0002，采用单因素方差分析（含Tukey校正）进行多重比较，三个独立实验，总细胞数n=659；799; 694; 669; 796; 810（siControl/siBAF#2/野生型细胞；siBAF#1/野生型细胞、siBAF#3/野生型电池；siControl/siBAF#2-抗性细胞；siBAF#1/siBAF#2-抗性细胞））。（J） siRNA转染96小时后hTERT-RPE1细胞Lamin B的免疫荧光染色。DNA用Hoechst 33342染色。（K） 通过监督机器学习，将（J）中所示的细胞自动分类为正常或微核形态（条形图表示平均值±标准差。，∗∗∗∗通过双尾t检验，p<0.0001，n=1184（siControl），n=890（siBAF），来自3个独立实验）。比例尺为10μm。
图S3
图S3
BAF耗竭干扰核组装，但不影响染色体分离，与图2（A和B）有关。（A） 稳定表达H2B–mCherry的活HeLa细胞在siRNA转染后72小时有丝分裂退出时成像（中期细胞通过监督机器学习自动检测，以触发延时显微镜，直到后期）。在（B）中，通过对n=136（siControl）和n=154（siBAF）细胞的手动注释来量化（A）中所述的延时电影中的分离误差。点表示实验，线表示平均值。（C和D）通过化学诱导靶向质膜（PM）急性消耗细胞质BAF。（C） 方法示意图。稳定共表达Lyn11质膜锚（PM锚）的HeLa细胞与mCherry-FRB融合，产生了抗siRNA版本的FRKP-EGFP-BAF，用于雷帕霉素诱导FRKP-EGFP-BAF重新定位到PM，而内源性BAF被RNAi耗尽。（D） 在siRNA转染72小时后，对稳定表达（C）中所示结构的活细胞和核膜的额外标记物（Lap2β-TagBFP）进行成像。在siRNA转染后48小时瞬时转染编码PM锚的额外质粒，以提高表达水平，因为该三重稳定细胞系随着时间的推移降低了组成性PM锚的表达。中期添加雷帕霉素，最终浓度为500 nM。核包膜标记仅记录有丝分裂后细胞，而不记录在延时数据中，以减少细胞的蓝光照射。然后对来自四个独立实验的细胞进行有丝分裂退出跟踪和手动分析。DNA经SiR-Hoechst染色。（E） siRNA转染72h后稳定表达H2B–mCherry和Lap2β–EGFP的活HeLa细胞的长期成像。比例尺在（A）中为5μm，在（D）和（E）中为10μm。
图3
图3
BAF将核膜限制在后期染色体集合（A）表面。在有丝分裂退出期间，siRNA转染72小时后（t=min:s，从后期开始，n=46[siBAF]和n=45[siControl]细胞），对活细胞进行成像。虚线框表示下部面板中显示的区域。（B–E）Lap2β–EGFP在染色体上的积累。基于H2B-mCherry对晚期染色体群进行跟踪和（B）自动分割。（C） 如图所示，边缘和内部染色质区域由染色质分割自动衍生。（D） Lap2β-EGFP的量化如所示（A；曲线和阴影区域分别表示平均值±SD；n=66[siBAF]和n=61[siControl]染色体群）。（E） 21:00 min:s时边缘和内部集合亚区的Lap2β-EGFP，归一化为相应控制条件下的平均信号（点表示染色体集合，线表示中位数和四分位数范围）。（F–H）染色体群的形状，如（A）所示。（F） 31:30 min时（A）所示染色体群的轮廓：s。（G）随时间的圆度测量（曲线±范围表示平均值±SD，n=72[siBAF]和n=76[siControl]染色体群）。（H） 31:30 min:s时的圆度（点表示染色体集合，线表示中位数和四分位数范围）。比例尺，10μm。另请参见图S3和S4以及电影S3。
图S4
图S4
BAF耗竭细胞中的染色体集合几何结构，与图3相关（A–E）有丝分裂退出期间染色体集合几何结构的分析。（A） 测量示意图如（B-E）所示，通过局部自适应阈值进行分割。（B） 染色体群的高度（曲线和范围表示平均值±标准差，染色体群的完整最大投影轨迹）。虚线表示7:00 min:s时核膜与染色体群的初始重新结合的时间点（另见图3A）。（D） 和（E）如（B，C）所示的细胞染色体群的宽度。（F–H）有丝分裂退出期间微管的分布分析。（F） siRNA转染后96小时对HeLa细胞中的Tubulin和Lamin B进行免疫荧光染色。用Hoechst 33342对DNA进行染色（显示了两个独立实验的代表性图像）。根据染色体系综距离和皱纹进入状态，将细胞分为有丝分裂阶段。（G） 细胞微管分布分析。通过阈值分割染色体，并使用掩模（“染色体”）测量染色体集合内的微管蛋白信号。然后将面罩扩张，生成1μm厚的带（“细胞质”），以测量细胞质微管蛋白信号。（H） 微管分布的量化（绘制四分位范围的中位数，∗∗∗p<0.0002，∗∗∗∗Kruskal-Wallis对多重比较进行了Dunn校正，结果p<0.0001，两个独立实验中每个条件下n≥28个细胞）。（一） 与正常细胞培养条件下的前中期相比，200 ng/ml诺卡唑治疗BAF缺失细胞和对照细胞的疗效。（J） 在200 ng/ml诺卡唑和320 nM逆转剂存在下，siRNA转染72小时后，对稳定表达H2B–mCherry和Lap2β–EGFP的活HeLa细胞进行长期成像。（K） 有丝分裂退出35分钟后染色体集合内部和边缘区域的Lap2β-EGFP荧光定量（另见图3C），并归一化为相应控制条件下的平均信号（点表示染色体集合，线表示中位数和四分位数范围，∗∗∗∗经Mann-Whitney检验，p<0.0001，ns>0.05，四个独立实验中n≥22个细胞）。比例尺为10μm。
图4
图4
形成单核需要BAF二聚体而非BAF-LEM结合（a）设计点突变以干扰BAF-LEM结合或BAF二聚化。BAF二聚体（蓝色）相对于LEM结构域（绿色）的结构上显示了点突变（红色）。洋红色表示DNA。（B） 分析示意图。（C） 重组野生型（WT）和突变BAF蛋白的分析。荧光标记的重组BAF蛋白与DNA包衣珠混合。然后，添加荧光标记的重组LEM结构域，并通过共焦显微镜对珠子进行成像。（D和E）量化与珠子（E）结合的BAF（D）和LEM（点表示珠子，线表示中位数和四分位数范围，每个条件n≥40个珠子）。稳定表达抗siBAF转基因细胞的（F和G）RNAi互补分析（F）IF。（G） 微核表型的量化。通过监督机器学习将细胞自动分类为正常形态或微核形态（条形图表示平均值±SD，样品编号见STAR方法）。（H） BAF-EGFP在野生型HeLa细胞和EGFP-BAF中的活定位L58R型纯合L58R突变体HeLa细胞中的突变体。（一） 沿直线剖面分析EGFP荧光，如（H）所示（曲线和范围表示平均值±SD，n=10个细胞/条件）。（J） EGFP标记BAF的免疫沉淀（IP），如（H）所示。利用抗Lap2和抗EGFP抗体通过免疫印迹分析检测共纯化的Lap2。（K和L）野生型或纯合型BAFL58R型通过IF（K）分析突变细胞，并通过监督机器学习（L）自动量化微核细胞（条形表示平均值±SD，样本数见STAR方法）。比例尺在（C）中为5μm，在（F）、（H）和（K）中为10μm。另请参见图S5。
图S5
图S5
纯合BAF的特性L58R型突变细胞系，与图4（A）RNAi与siRNA-resistant BAF转基因互补分析相关，在hTERT-RPE1细胞中稳定表达。在转染靶向内源性BAF的siRNA后112小时，固定细胞并进行免疫荧光染色。（B）通过监督机器学习将（A）中所示的细胞自动分类为正常或微核形态（条形表示平均值±s.d。，∗∗∗∗p<0.0001，采用单因素方差分析（含Tukey校正）进行多重比较，三个独立实验，总细胞数n=1594；1307; 1736; 1820; 1597（siControl/亲本细胞系；siBAF/亲代细胞系；siBAF/WT转基因；siBAF/L58R转基因；siBA F/G47E转基因）。（C–E）使用基因组编辑将L58R突变插入BAF的所有等位基因。（C） 基于CRISPR/Cas9的DNA链刻痕策略示意图，用于修改BAF1公司基因组位点。在修复模板上改变野生型BAF中亮氨酸58（L58）编码位置的核苷酸，以编码精氨酸（R），并插入AgeI限制位点。此外，沉默突变改变了sgRNAs的识别动机（PAM位点），以防止用模板修复的基因组位点被重新切割。（D） PCR产物扩增野生型细胞基因组编辑和L58R编辑克隆中的靶区。用AgeI对PCR产物进行诊断性限制性内切酶消化，分析所有内源性等位基因的成功编辑。（E） 野生型和CRISPR/Cas9突变细胞系L58R位点的DNA序列色谱图。星号表示核苷酸突变。（F） 野生型HeLa细胞和纯合型L58R突变HeLa电池中3xFLAG-EGFP标记的Lap2β的免疫沉淀（IP）以及EGFP和共纯化BAF和BAF的免疫印迹分析L58R型（G）在野生型细胞中稳定表达EGFP标记的野生型BAF和EGFP-BAF的活细胞有丝分裂出口的时间推移显微镜L58R型纯合L58R突变细胞中的突变转基因。注意EGFP-BAF和EGFP-BAFL58R型在后期染色体集合上同样富集（分别为5:00和7:30 min:s时间点），但只有野生型BAF在新生核的核膜上仍然富集（分别是40:00和24:30 min:s的时间点）。（H） 野生型和纯合型L58R突变细胞的增殖分析。三个独立实验中每一区域的细胞数变化的倍数。条形图表示平均值±标准差。（I）野生型和纯合L58R突变细胞的有丝分裂持续时间分析。分析来自三个独立实验的每个细胞系n=150个细胞的前期发作到后期发作的持续时间。（J） 野生型HeLa细胞和含有纯合内源性BAF的HeLa淋巴细胞的免疫荧光L58R型siRNA转染后96小时发生突变。（K） 野生型和内源性BAF的免疫印迹分析L58R型siRNA转染后96小时，HeLa细胞。比例尺为10μm。
图5
图5
BAF在染色体集合形成的整个表面富集（A）后期细胞的时间推移图像。DNA用SiR-Hoechst标记，并显示代表性细胞的单个共焦切片（n=34个细胞）。（B） 在诺卡唑存在下的时间推移图像，如（A）所示；t=0:00分：秒加入黄哌啶醇诱导有丝分裂退出（n=19个细胞）。（C） 基于（B）所示数据，BAF和Lap2β沿染色质表面的定位。分割的染色体集合轮廓显示为一条直线。注意，BAF最初在6:21 min:s时在整个染色质表面富集，而随后在被Lap2β覆盖的区域减少（左侧09:06 min:s）。（D） 有丝分裂退出细胞染色体上的总BAF-EGFP如所示（B；曲线和范围表示n=19个细胞的平均±SD）。另请参阅电影S4和S5。
图S6
图S6
BAF与体外纯化染色质的相互作用，与图6（A）HeLa细胞染色质纯化程序有关。（B） 通过考马斯染色SDS-PAGE凝胶对从该提取物中纯化的全细胞提取物和染色质进行成分分析。剖面图是指纯化的染色质通道。核心组蛋白根据预期大小进行注释，并覆盖H2B免疫印迹数据。（C） 分别使用抗H2B和抗BAF抗体对从该提取物纯化的全细胞提取物和染色质进行免疫印迹。（D） 体外检测重组BAF与纯化染色质的相互作用。X-Z扫描染色质结构的时间图像（方框标记染色质结构中的裁剪区域，如图6A所示）。如图所示将BAF和VRK1加入缓冲液中，用Hoechst 33324对DNA进行染色。（E） X-Z扫描染色质结构的时间图像（方框标记染色质结构中的裁剪区域，如图6D所示）。燃油附加费G47E型已按指示添加到缓冲区。比例尺为10μm。
图6
图6
BAF在纯化的染色质表面富集以诱导长程染色质压实（A）将纯化的染色质固定在有腔玻璃盖玻片上，并用Hoechst 33342染色。在00:00分钟：s将标记的重组BAF添加到1μM的最终浓度，并在08:20分钟：s将重组VRK1添加到40 nM的最终浓度。图像显示了染色质结构的X-Z扫描（概览如图S6D所示）。（B） 染色质表面上的线剖面的Kymograph，如所示（a，虚线）。请注意，添加VRK1后，BAF在整个染色质结构（黄色箭头）中瞬时重新定位。（C） BAF在染色质结构的表面和内部区域富集，如（A）所示（曲线和范围表示平均值±SD，n=5）。（D） 二聚体缺陷重组BAF的结合G47E型（1μM）纯化染色质（概述如图S6E所示）。（E） （D）中所示的染色质表面上的线剖面的Kymograph图，带有虚线。（F） BAF公司G47E型在染色质结构的表面和内部区域定量富集（曲线和范围表示平均值±SD，n=3）。（G-I）染色质压实分析。（G） 和（I）分别显示（B）和（E）中的波形图的DNA通道。（H） 连续添加BAF和VRK1后，染色质的紧致度显示为相对于染色质表面到玻璃表面的径向距离的距离（绘制平均值±SD，n=5）。（A）和（D）中的比例尺为10μm。另请参见图S6和电影S6。
图7
图7
BAF通过其DNA交叉桥活性（A–C）加强染色质表面并聚集微米级珠。染色体大小DNA珠（∅2.8μm）的体外聚集分析。（A） 实验装置。（B） 如（A）所示制备的珠子的透射光显微镜图像。通过阈值分割珠子。按指示添加蛋白质至1μM。燃油附加费G47E型在5μM最终浓度下进行测试，以解释与DNA珠的结合亲和力降低的原因。对于WT和L58R样品，在初始分析后添加VRK1。（C） 数据中珠簇大小的量化，如所示（B；n=每种情况120个粒子，点表示珠簇，线表示四分位范围的中位数）。（D–G）染色质表面的原子力显微镜。（D） 实验装置。纯化的染色质附着在有腔盖玻片上，并通过悬臂进行探测，悬臂在尖端接触时弯曲，使激光偏转，用于计算机械阻力。然后，添加重组BAF蛋白和随后的重组VRK1，并再次探测相同的染色质位点。（E） 一个实验的代表力曲线。（F） 杨氏模量由野生型BAF的连续测量得出，如所示（E；轨迹表示单个实验，n=连续测量的22个染色质位点）。（G） 杨氏模量如（F）所示，但对于BAFG47E型（n=11）。（H–M）右旋糖酐扩散到纯化染色质中的分析。纯化的染色质在（H）不存在或（I）存在5μM BAF（细胞内浓度=7μM）的情况下预孵育（Itzhak等人，2016）。然后将500kDa右旋糖酐添加到缓冲液中，并对扩散成像（时间表示添加后的秒数）。（J） 500kDa右旋糖酐缓冲-染色质边界上右旋糖苷分布的量化（曲线和范围表示平均值±SD，n=6）。纯化的染色质在5μM BAF的（K）缺失或（L）存在下预先培养，随后添加4.4 kDa右旋糖酐。（M） 量化右旋糖酐在缓冲-染色质边界的分布（曲线和范围表示平均值±SD，n=4）。（N） 在核膜重组之前，BAF-DNA网络在后期染色体表面形成的模型。比例尺为（B）中的10μm和（H）–（L）中的20μm。另请参见图S7和电影S7。
图S7
图S7
BAF体外功能和BAF染色质在细胞中的表面定位，与图7（A）在添加VRK1（最终浓度为150 nM，绘制四分位范围的中位数）前后，荧光标记的BAF重组蛋白结合到DNA涂层珠的定量，∗∗∗∗Kruskal-Wallis的p<0.0001，对多重比较进行Dunn校正，来自两个独立实验的每个条件n≥20个粒子）。注意，二聚体缺陷突变型BAFG47E型VRK1激酶不能从DNA微球中释放，这表明VRK1特异性识别BAF二聚体而不是单体。（B） 用于测试BAF在单分散条件下结合后跨桥DNA珠能力的实验装置。（另请参见图7A–7C）。（C） 珠簇大小的量化（n=三个独立实验中每种条件下150个粒子，点表示珠簇，∗∗∗∗克鲁斯卡尔·沃利斯（Kruskal-Wallis）的p<0.0001，邓恩（Dunn）修正用于多重比较）。（D–I）VRK1缺失表型分析。稳定表达H2B–mCherry和Lap2β–EGFP的HeLa细胞在siRNA转染后48小时成像16小时。（D） 对进入有丝分裂的细胞进行细胞命运分析，并手动将其分为进入后期的细胞和处于细胞死亡状态但未分离的细胞（三个独立实验中的n=125；130个细胞（siControl；siVRK1））。横线表示平均值±SD。进一步分析进入后期的细胞（E）有丝分裂持续时间（前中期开始到后期开始）和（F）染色体分离错误（染色体桥和滞后染色体）。横线表示平均值±SD。（G）表示VRK1缺失后有丝分裂退出期间染色体桥和微核形成的示例（黄色箭头）。（H） 中期和有丝分裂退出期间有丝分裂染色体上Lap2β-EGFP阳性膜的定量（三个独立实验中每个条件下n>28个细胞，点表示染色体集合，线表示四分位范围的中位数，Kruskal-Wallis校正后ns>0.05）。（一） VRK1缺失细胞分离错误后核膜重组结果分析（三个独立实验中的56个细胞）。条形图表示平均值±标准差。（J）稳定表达EGFP-BAF的细胞系的免疫印迹分析以及与亲代细胞系的比较。上部印迹用抗BAF抗体进行检测，下部印迹用抗管蛋白抗体进行检测。（K-M）有丝分裂退出期间稳定表达BAF-EGFP和mCherry-Lap2β的细胞的活细胞成像。DNA用SiR-Hoechst标记，显示一个共焦切片。线剖面图（黄色虚线）用于（L）绘制BAF-EGFP穿过染色质表面的荧光强度，该位置尚未被核膜包裹。将高斯函数拟合到数据中，以确定半最大值（FWHM=2.35）时的（M）全宽∗高斯拟合的标准偏差）。点表示来自两个独立实验的n＝16个细胞。条形图表示平均值±标准差。（N）有丝分裂退出过程中细胞质中BAF-EGFP的消耗。背景：中期和后期细胞中细胞质BAF的校正测量值被归一化为中期信号并标绘（来自两个不同实验的n=16个细胞）。条形图表示平均值±标准偏差。（O）原子力显微镜设置。（P） 在没有或存在5μM BAF的情况下，体外检测荧光标记的500 kDa右旋糖酐向纯化染色质的扩散。X-Y扫描染色质结构的时间图像（虚线分别表示图7H和7J中所示的区域）。在0 s时将右旋糖酐添加到缓冲液中，用Hoechst 33324对DNA进行染色。比例尺为10μm in（G）、5μm in。
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中的注释

  • 核膜：染色体：一层BAF将所有染色体结合在一起。
    斯特齐兹·P。 斯特齐兹·P。 Nat Rev Mol细胞生物学。2017年10月；18(10):592-593. doi:10.1038/nrm.2017.96。Epub 2017年9月6日。 Nat Rev Mol细胞生物学。2017 PMID：28875991 没有可用的摘要。
  • DNA交联剂收集有丝分裂染色体。
    Sun M、Heald R。 Sun M等人。 开发单元。2017年9月11日；42(5):440-442. doi:10.1016/j.devcel.2017.08.010。 开发单元。2017 PMID：28898675
  • 染色体如何结合。
    Wilson KL，Dharmaraj T。 Dharmaraj T等人。 自然。2017年11月30日；551(7682):568-569. doi:10.1038/d41586-017-07439-7。 自然。2017 PMID：29189813 没有可用的摘要。

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