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.2015年7月；63(1):141-7.
doi:10.1016/j.jhep.2015.01.036。 Epub 2015年2月9日。

肝星状细胞表达的β-PDGF受体调节小鼠肝损伤中的纤维化，但不影响其致癌作用

佩里·科卡巴约格鲁 1, 阿比盖尔小伙子 2, 杨敏·A·李 2, 安娜·克里斯蒂娜·德拉戈米尔 2, 孙晓晨 2, 玛丽亚·伊莎贝尔·菲尔 三, 天鹅突击 三, 科斯蒂卡·阿洛曼 2, 菲利普·索里亚诺 4, 宇津浩士达（Yujin Hoshida） 5, 斯科特·弗里德曼 6
附属公司

肝星状细胞表达的β-PDGF受体调节小鼠肝损伤中的纤维化，但不调节致癌作用

佩里·科卡巴约格鲁等。 肝脏病学杂志. 2015年7月.

摘要

背景和目标：快速诱导β-PDGF受体（β-PDGFR）是肝星状细胞活化的核心特征，但其在体内的细胞影响尚不明确。我们使用具有不同β-PDGFR活性的遗传模型，在体内探讨了β-PDGFR-介导的途径激活对肝损伤、纤维化和致癌过程中肝星状细胞反应的贡献，并评估了其在人类肝硬化中的预后意义。

方法：在四氯化碳（CCl4）或胆管结扎后，评估星状细胞中β-PDGFR缺失或组成性激活对纤维化的影响。在单剂量二乙基亚硝胺（DEN）和重复注射CCl4后追踪纤维化肝的肝癌发生。从表达或缺乏β-PDGFR的分离星状细胞进行基因组表达谱分析，以确定解除调控的途径，并评估其与人类肝硬化预后基因特征的相关性。

结果：肝星状细胞中β-PDGFR的耗竭减少了体内损伤和纤维化，而其自身激活加速了纤维化。然而，DEN诱导的癌前病变的发展没有差异。基因组分析揭示了ERK、AKT和NF-κB通路，以及之前确定的作为星状细胞中β-PDGFR下游的丙型肝炎病毒（HCV）相关肝硬化186基因预后标志的子集。在人类队列中，β-PDGFR特征与HCC的发展无关，但与HCV肝硬化的不良预后显著相关。

结论：β-PDGFR是体内肝损伤和纤维化的关键介体，导致人类肝硬化预后不良，但不是通过增加HCC的发展。

关键词：肝硬化；基因表达特征；肝癌；路径分析；受体酪氨酸激酶。

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作者没有透露任何冲突。

数字

图1
图1。β-PDGFR表达与小鼠肝星状细胞活化相关体内和在体外
（A） 给小鼠注射三次油或CCl4诱导急性肝损伤，于末次注射后2天处死。全肝裂解物的免疫印迹显示，损伤后β-PDGFR、磷酸化-β-PDGFR和αSMA的表达增加。（B，C）Δβ-PDGFR小鼠和对照鼠一次注射CCl4然后在48小时后隔离HSC。原代造血干细胞在培养中保存6天。（B） 免疫印迹显示对照动物的受体在配体暴露后磷酸化，而Δβ-PDGFR动物的HSC缺乏受体激活。（C） 免疫印迹显示，与野生型β-PDGFR小鼠相比，培养中的Δβ-PDGFR-小鼠HSC活化降低，胶原蛋白I和αSMA表达降低。图中显示了每条带的密度分析，验证了Δβ-PDGFR小鼠原发性HSC中β-PDGFR-的显著降低以及HSC激活标记物的表达降低。数据表示至少3个单独实验的平均值（*p<0.05，误差条表示SEM）。每个实验中每种条件使用3只动物。蛋白质比率（标准化为calnexin）用于量化相对于对照组的折叠变化，并显示在每个印迹的下方。
图2
图2。HSCβ-PDGFR缺失导致胶原沉积减少体内
（A–E）Δβ-PDGFR和对照小鼠注射CCl4在一周或六周内诱发急性或慢性肝损伤。（A） 急性或慢性肝损伤后石蜡包埋肝脏切片的天狼星红染色显示慢性损伤后胶原沉积显著降低（放大200倍）。（B） 图表显示了通过形态分析测量的天狼星红染色阳性的肝脏面积百分比。与对照组相比，Δβ-PDGFR动物的纤维化组织面积显著减少。（C） CCl 6周后每克全肝羟脯氨酸含量的测定4反映了与对照组相比，Δβ-PDGFR肝脏中羟脯氨酸含量降低。（D） 急性和慢性损伤期间血清AST和ALT水平。（E） 全肝mRNA表达胶原蛋白α1（一）, α座椅模块组件, β-PDGFR公司CCl 6周后4治疗证实，损伤后对照动物体内的星状细胞激活基因表达增加，而Δβ-PDGFR组没有增加。所有数字表示每个实验组至少3只动物的平均值。mRNA的表达标准化为Gapdh公司（*p<0.05，**p<0.001；误差条表示SEM）。
图3
图3。星状细胞上β-PDGFR的“βJ”组成性激活突变导致损伤后胶原沉积增加体内
（A–D）βJ和对照小鼠注射CCl4导致急性或慢性肝损伤。（A） 急性或慢性肝损伤后石蜡包埋肝脏切片的天狼星红染色显示急性和慢性损伤后胶原沉积显著增加（放大200倍）。（B） 图中显示了通过形态计量学测量的天狼星红染色阳性的肝脏面积百分比。与对照组相比，βJ动物肝脏的纤维化组织面积显著增加。（C） CCl 6周后每克全肝羟脯氨酸含量增加4与对照组相比，βJ小鼠的肝脏中。（D） α的全肝mRNA表达座椅模块组件和胶原蛋白α1（一）CCl 6周后4治疗证实肝损伤后βJ动物星形细胞激活基因表达增加。（E） 急性肝损伤后石蜡包埋肝脏切片的结蛋白染色显示，与对照组相比，βJ小鼠肝脏内的星状细胞扩张增加。（F） 图中显示了形态计量学测量的结蛋白阳性组织面积百分比。所有数字表示每个实验组至少5只动物的平均数。mRNA的表达标准化为Gapdh公司（*p<0.05，**p<0.001；误差条表示SEM）。
图4
图4。在接受DEN和慢性CCl治疗的小鼠中，β-PDGFR的缺失可降低纤维化，但不降低肿瘤负担4与肝硬化患者更好的预后有关
在第15天用单剂量DEN治疗小鼠，然后每周注射CCl4在22次注射CCl的最后48小时后牺牲4（A）石蜡包埋肝脏切片用天狼星红染色以评估纤维化组织含量（放大200倍）。（B） 通过形态计量学测量Δβ-PDGFR小鼠肝脏胶原面积的减少。条形图表示每个实验组n=5只动物的平均值。（**p<0.001；误差条表示SEM）。（C） GSEA图显示，在HCV肝硬化患者队列中，β-PDGFR依赖性与基因特征相关，可判断预后是否良好。从β-PDGFRfl/fl GFAP-Cre阴性（以WT表示）或β-PDGFR fl/fl GFAP-Cre阳性（以KO表示）小鼠分离的原代肝星状细胞的基因阵列样本与人类HCV肝硬化队列整体预后良好或不良的基因特征相关。（a） β-PGDFR-敲除基因特征与肝硬化良好预后的相关性。在216例HCV相关性肝硬化早期患者（n=216）中，评估了β-PGDFR-敲除基因特征的富集与总死亡率的风险。NES=−1.14，标称p=0.21，FDR=0.22。（b） β-PGDFR基因特征与HCV肝硬化不良预后的相关性。对216例HCV相关性肝硬化早期患者（n=216）的β-PGDFR基因特征的富集与总死亡率的风险进行了评估。NES=1.11，标称p=0.25，FDR=0.23。使用GSEA评估基因。（D） 从DNA微阵列数据中选择野生型和β-PDGFR敲除小鼠之间的5个差异表达最高的基因（Anxa1、Dab2、Ergic2、Lpp和Prdx5），比较DNA微阵列和RT-qPCR之间β-PDGFR-敲除介导的差异基因表达。为了验证RT-qPCR中的差异表达，设计了7对引物（2对用于Ergic和Prdx5），并对相同的RNA等分进行了三次分析。
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