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.1989年5月;3(5):612-9.
doi:10.1101/gad.3.5.612。

cAMP应答增强子/启动子序列的CpG甲基化TGACGTCA消除特异性因子结合和转录激活

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cAMP应答增强子/启动子序列的CpG甲基化TGACGTCA消除特异性因子结合和转录激活

S M Iguchi-Ariga公司等。 基因开发. 1989年5月.
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摘要

在哺乳动物和其他脊椎动物中,CpG位点的胞嘧啶甲基化通常与基因活性呈负相关。由于启动子区域的甲基化对这种效应最为关键,最简单的假设是CpG甲基化干扰特定转录因子的结合。我们用两个包含CpG二核苷酸的不同转录因子结合位点(即cAMP反应元件(CRE;5'-TGACGTCA)和Sp1-结合位点(5'-GTGGGCGGACT)来检验这一假设。我们以前曾报道过,Sp1结合位点的CpG甲基化既不影响HeLa细胞中的因子结合也不影响转录,这可能与Sp1通常与看家基因的启动子相关。相反,CRE通常与细胞类型特异性基因的启动子相关。在报告基因上游克隆了一个合成寡核苷酸,该寡核苷酸包含两个串联CRE,源自编码人类糖蛋白激素α亚单位的基因。该基因的转录依赖于PC12和HeLa细胞中的CRE序列。带移和甲基化干扰分析表明,即使cAMP仅在PC12细胞中观察到诱导,但在两种细胞系中,类似(如果不是相同的话)因子与CRE结合。CRE共识序列(TGACGTCA)的CpG甲基化导致两种细胞类型中特异性因子结合的丧失以及体内外转录活性的丧失。这表明甲基化启动子的失活至少在某些情况下可以解释为它们不能结合特定转录因子。

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