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.2014:2014:974393.
doi:10.1155/2014/974393。 Epub 2014年3月11日。

CHMP4B和自噬与微核的相关性：对白内障形成的影响

安东尼娅·萨戈纳 1, Ioannis P Nezis公司 2, 哈拉尔德·斯坦马克 三
附属公司

CHMP4B和自噬与微核的相关性：对白内障形成的影响

安东尼娅·萨戈纳等。 生物识别识别. 2014.

摘要

自噬是细胞自我升级的机制，对细胞内环境稳定和分化非常重要。运输（ESCRT）机械所需的内体分选复合体的组成部分是内体分选、自噬和胞质分裂完成所必需的。这里我们发现，ESCRT-III亚单位CHMP4B不仅定位于正常的细胞动力学桥，而且定位于染色体桥和微核，微核被溶酶体和自噬体包围。此外，CHMP4B可以与染色质共同免疫沉淀。有趣的是，与常染色体显性后极性白内障相关的CHMP4B突变消除了CHMP4B定位于微核的能力。我们认为CHMP4B通过与染色质的结合，可能参与微核和其他核外染色质的自噬体降解。这可能与晶状体细胞分化过程中的DNA降解有关，从而可能保护晶状体细胞免受白内障的发展。

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数字

图1
图1
CHMP4B定位于互连细胞中的各种类型的细胞间桥。（a） 用CHMP4B、a-tubulin和Hoechst染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B定位于连接细胞的细胞间桥（箭头所示）。比例尺：10μm.（b）–（d）用CHMP4B和Hoechst染色的Hep2、MCF-7和U2O细胞的共焦显微照片。CHMP4B定位于上述所有细胞系中细胞之间的桥（箭头）。比例尺：10μm.（e）用CHMP4B、Aurora B和Hoechst染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B在胞质分裂期间定位于细胞间桥（箭头所示）。比例尺：10μm.（f）-（g）用CHMP4B、Aurora B和Hoechst染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B定位为薄（比例尺：5μm） （f）和厚度（比例尺：10μm） （g）独立于极光B定位的桥梁（箭头）。
图2
图2
CHMP4B定位于染色体桥和微核。（a） ，（b）用CHMP4B、Aurora b和Hoechst染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B与染色体桥相关（箭头）（比例尺：10μm） （a）也以更高的放大率（箭头）表示（比例尺：10μm） （b）。（c） ，（d）用CHMP4B和Hoechst染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B连接到染色体桥（箭头）（比例尺：5μm） （c）并与染色体桥中存在的DNA共定位（箭头）（比例尺：10μm） （d）。（e） 用CHMP4B和Hoechst染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B定位于微核（箭头所示）。比例尺：10μ米。
图3
图3
CHMP4B与组蛋白2B和Lamin A共同免疫沉淀。（A）用CHMP4B、组蛋白2B和DAPI染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B与组蛋白2B在微核中共定位（箭头所示）。插图中显示了微核的放大。比例尺：10μm.（b）–（d）用CHMP4B、Lamin A和DAPI染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B在某些情况下与微核中的拉明蛋白A共定位（箭头）（b），而在一些情况下与拉明蛋白不共定位（如箭头所示）（c），并定位于拉明蛋白染色的染色体桥（箭头所示（d）。比例尺：10μm.（e）用CHMP4B抗体对HeLa细胞裂解物进行免疫沉淀（IP）。免疫沉淀蛋白通过Western blotting检测，使用抗H2B、抗Lamin A和抗CHMP4B抗体。
图4
图4
Lamp1和LC3位于HeLa和HLEB-3细胞微核附近。（a） 用CHMP4B、Lamp1和DAPI染色的HeLa细胞的共焦显微照片。Lamp1阳性溶酶体位于CHMP4B阳性微核附近（箭头所示）。比例尺：10μm.插图中显示了用CHMP4B、Lamp1和DAPI染色的微核放大。（b） 用CHMP4B、LC3和DAPI染色的HeLa细胞的共焦显微照片。CHMP4B阳性微核与LC3相邻（箭头所示）。比例尺：10μm.插图中显示了用CHMP4B、DAPI和LC3染色的微核的放大。（c） -（d）用CHMP4B、Lamin A和DAPI染色的HLEB-3细胞的共焦显微照片。CHMP4B存在于细胞间桥（c）和微核（d）上。比例尺：10μm.（e）-（f）用Lamp1、LC3和DAPI染色的HLEB-3细胞的共焦显微照片。Lamp1阳性和LC3阳性结构位于微核附近（箭头所示）。比例尺：10μ米。
图5
图5
白内障中发现的CHMP4B突变体对染色体桥和微核的定位降低。（a） -（b）用FLAG-CHMP4B全长转染并用FLAG表位M2抗体和Hoechst染色的HeLa细胞的共聚焦显微照片。FLAG-CHMP4B全长与染色体桥和微核（a）-（b）（箭头）密切相关。比例尺：10μm和5μm.（c）-（d）全长转染FLAG-D129V-CHMP4B并用FLAG表位M2抗体和Hoechst染色的HeLa细胞的共焦显微照片。FLAG-D129V-CHMP4B全长与染色体桥和微核无明显关联（箭头所示）。比例尺：10μm.（e）用FLAG-CHMP4B全长野生型与FLAG-CHMP4B-D129V全长突变体转染细胞中与DNA共定位的%CHMP4A定量的图示。误差条显示平均值±SD。FLAG-CHMP4B全长：5个独立实验，n个=651个单元格。FLAG-CHMP4B-D129V全长：5个独立实验，n个=570个单元格。P（P）全长FLAG构造的值：0.048。这个P（P）数值是通过独立样本的比较平均值得出的吨-测试（SPSS，v.16.0）。
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