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.2015年1月15日；34(3):357-63.
doi:10.1038/onc.2013.583。 Epub 2014年1月20日。

SIRT1在UVB诱导的皮肤肿瘤发生中的双重作用

M Ming先生 1, K索尔塔尼 1, C R谢伊 1, X李 2, 是的，是的，他 1
附属公司

SIRT1在UVB诱导的皮肤肿瘤发生中的双重作用

M Ming先生等。 癌基因. .

摘要

蛋白质脱乙酰酶SIRT1调节新陈代谢、衰老和癌症的各种途径。然而，SIRT1在皮肤癌中的作用尚不清楚。在这里，使用表皮SIRT1靶向缺失的小鼠，在耐药B6和敏感SKH1无毛背景下，我们表明SIRT1在紫外线B（UVB）辐射诱导的皮肤癌发展中的作用取决于其基因剂量。SIRT1的角质细胞特异性杂合缺失促进UVB诱导的皮肤肿瘤发生，而SIRT1纯合缺失抑制皮肤肿瘤的发展，但使B6小鼠对慢性日光损伤敏感。在小鼠皮肤中，SIRT1对UVB诱导的DNA损伤修复和着色性干皮病C（XPC）的表达是单倍的，XPC是修复UVB导致的DNA损伤的关键蛋白。与正常人皮肤相比，SIRT1的下调与人类皮肤鳞癌中XPC的下调在蛋白质和mRNA水平上是平行的。相反，小鼠皮肤中纯合子SIRT1缺失增加了p53乙酰化及其转录目标Noxa的表达，并使表皮对UVB诱导的体内凋亡敏感，而杂合SIRT1的缺失没有这种作用。SIRT1在DNA修复和细胞生存中的基因剂量依赖性功能与SIRT1对UVB诱导的皮肤肿瘤发生的双重作用一致。我们的结果揭示了SIRT1在皮肤肿瘤发生中的基因剂量依赖性体内功能，并可能阐明SIRT1对DNA损伤诱导的上皮癌的作用。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突

Keyoumars Soltani担任Elorac Pharma的董事会成员，并从Elorac Pharma、DUSA、Winston和Gideon Pharmaceuticals接收股票，但这些股票均与本研究无关。其他作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
SIRT1在UVB诱导的皮肤肿瘤发生中起着重要作用。A–B，B6背景下WT、cHet和cKO小鼠皮肤（A）和肝脏（B）中SIRT1和GAPDH的免疫印迹分析。A中SIRT1印迹的上部带显示野生型SIRT1蛋白，而下部带显示非功能性截短蛋白是由于SIRT1催化结构域的保守Sir2基序被切除所致。C、 WT和cHet小鼠皮肤中SIRT1活性的荧光测定（n=3）。D、 慢性UVB辐射后WT、cHet和cKO组（n=15）无瘤小鼠的百分比（%）。
图2
图2
SIRT1缺乏使小鼠皮肤对紫外线诱导的损伤敏感。A、 紫外线B损伤后SIRT1 WT、cHet和cKO B6小鼠的总体存活率。B、 紫外线损伤后SIRT1 WT、cHet和cKO小鼠的非肿瘤生存率。C、 UVB照射cKO小鼠的典型皮肤损伤。D、 SIRT1 cKO小鼠邻近和病变表皮的组织学分析。E、 SIRT1 cKO小鼠邻近和病变表皮Ki67阳性细胞的免疫组织化学分析。比例尺，100μm。
图3
图3
SIRT1在UVB诱导的SKH1小鼠皮肤肿瘤发生中具有双重作用。A、 慢性UVB辐射后WT（n=14）、cHet（n=15）和cKO（n=15）组中无瘤小鼠的百分比（%）。B、 UVB辐射后不同周WT、cHet和cKO小鼠的平均肿瘤数（#）。C、 肿瘤大小（mm2)UVB辐射后不同周，WT、cHet和cKO小鼠中的每只小鼠。D、 研究结束时WT、cHet和cKO中肿瘤总数、乳头状瘤（PAP）和鳞状细胞癌的数量（#）。E、 WT、cHet和cKO小鼠中SCC与乳头状瘤的比率。
图4
图4
SIRT1对UVB诱导的DNA修复和XPC表达是单倍体足够的。A、 对转染siRNA靶向SIRT1（siSIRT1）或阴性对照（NC）siRNA.B的NHEK细胞中的SIRT1、XPC、XPA和GAPDH进行免疫印迹分析，对转染siSIRT1或NC.C的NHEK细胞中CPD水平进行时隙印迹分析、对WT、cHet和cKO小鼠皮肤（n=5）中XPC mRNA水平进行实时PCR分析。*，P（P）<0.05，cHet或CKO与WT小鼠皮肤之间存在显著差异。D、 WT、cHet和cKO B6小鼠皮肤中XPC和GAPDH的免疫印迹分析（n=5）。E、 UVB辐射后0和24小时WT、cHet和cKO B6小鼠皮肤中CPD水平的缝隙印迹分析。F、 转染siNC、siSIRT1和siSIRT1/XPC的NHEK细胞中SIRT1、XPC和GAPDH的免疫印迹分析。G、 在UVB辐射后0、6和24h，对转染siNC、siSIRT1和siSIRT1/XPC的NHEK细胞的CPD水平进行slot-blot分析。H、 正常人皮肤和鳞状细胞癌样品中SIRT1、XPC和GAPDH的免疫印迹分析。I、 正常人皮肤和短链氯化石蜡中SIRT1和XPC mRNA水平的实时PCR分析。*，P（P）<0.05，SCC与正常皮肤之间存在显著差异。
图5
图5
SIRT1缺陷可通过激活p53促进紫外线诱导的细胞凋亡。A、 UVB诱导WT、cHet和cKO B6小鼠表皮细胞凋亡的TUNEL分析（n=5）。比例尺，50μm。B、 定量A中TUNEL阳性（+）细胞的百分比（%）*P（P）<0.05，cKO和WT小鼠之间存在显著差异。C、 UVB后1.5小时和6小时转染siSIRT1或NC的NHEK细胞中SIRT1、Ac-p53、p53和GAPDH的免疫印迹分析。D、 最终UVB后24小时，对WT、cHet和cKO小鼠皮肤（n=5）的Ac-p53、p53、活性Caspase3和GAPDH进行免疫印迹分析。E–G，对WT、cHet和cKO B6小鼠皮肤组织中的Noxa（E）、Puma（F）和Bax（G）进行实时PCR分析*P（P）<0.05，cKO和WT小鼠之间存在显著差异。H、 UVB后24小时NHEK细胞凋亡分析（50 mJ/cm2)或通过流式细胞仪分析亚G1细胞进行假手术（百分比，%）。用靶向SIRT1（siSIRT1）、p53（sip53）或两者结合的siRNA转染NHEK细胞。使用阴性对照siRNA（siNC）作为转染对照。I.UVB后24h NHEK细胞凋亡分析（50 mJ/cm2)或通过流式细胞仪分析亚G1细胞进行假手术（百分比，%）。NHEK细胞转染siNC、p53 K382R（p53Mut）、siSIRT1或siSIRT1/p53Mut。空载体用作p53Mut的对照*P（P）<0.05，差异显著。NS，P>0.05，无统计学意义。
图5
图5
SIRT1缺陷可通过激活p53促进紫外线诱导的细胞凋亡。A、 UVB诱导WT、cHet和cKO B6小鼠表皮细胞凋亡的TUNEL分析（n=5）。比例尺，50μm。B、 定量A中TUNEL阳性（+）细胞的百分比（%）*P（P）<0.05，cKO和WT小鼠之间存在显著差异。C、 UVB后1.5小时和6小时转染siSIRT1或NC的NHEK细胞中SIRT1、Ac-p53、p53和GAPDH的免疫印迹分析。D、 最终UVB后24小时，对WT、cHet和cKO小鼠皮肤（n=5）的Ac-p53、p53、活性Caspase3和GAPDH进行免疫印迹分析。E–G，对WT、cHet和cKO B6小鼠皮肤组织中的Noxa（E）、Puma（F）和Bax（G）进行实时PCR分析*P（P）<0.05，cKO和WT小鼠之间存在显著差异。H、 UVB后24小时NHEK细胞凋亡分析（50 mJ/cm2)或通过流式细胞仪分析亚G1细胞进行假手术（百分比，%）。用靶向SIRT1的siRNA（siSIRT1）、p53（sip53）或其组合转染NHEK细胞。阴性对照siRNA（siNC）作为转染对照。I.紫外线照射（50mJ/cm）后24小时NHEK细胞的凋亡分析2)或通过流式细胞仪分析亚G1细胞进行假手术（百分比，%）。NHEK细胞转染siNC、p53 K382R（p53Mut）、siSIRT1或siSIRT1/p53Mut。空载体用作p53Mut的对照*P（P）<0.05，差异显著。NS，P>0.05，无统计学意义。
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