跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2012年9月19:9:221。
doi:10.1186/1742-2094-9-221。

小干扰RNA介导的Müller细胞Ccl2抑制减弱视网膜变性后的小胶质细胞募集和光感受器死亡

马特·鲁塔 1, 里卡多·纳托利, 1月M日Provis
附属公司

小干扰RNA介导的Müller细胞Ccl2抑制减弱视网膜变性后的小胶质细胞募集和光感受器死亡

马特·鲁塔等。 J神经炎症. .

摘要

背景：炎症细胞的募集和激活被认为会加剧视网膜变性疾病（如年龄相关性黄斑变性（AMD））中光感受器的死亡。我们使用靶向小干扰（si）RNA研究了Müller细胞衍生的趋化因子（C-C基序）配体（Ccl）2表达在光介导的视网膜变性中单核细胞/小胶质细胞浸润和光感受器死亡中的作用。

方法：成年Sprague-Dawley大鼠经玻璃体内注射1μg Ccl2 siRNA或搅乱的siRNA，然后暴露于1000勒克斯的光下24小时。给小鼠服用过量的巴比妥酸盐，然后采集视网膜并评估其在强光照射下的效果。通过定量PCR、免疫组织化学和原位杂交评估Ccl2的表达。用标记物ED1和电离钙结合适配器（IBA）1免疫标记的视网膜冷冻切片计数单核细胞/小胶质细胞，并用末端dUTP缺口末端标记评估感光细胞凋亡。

结果：与对照组相比，玻璃体内注射Ccl2 siRNA显著降低光损伤后Ccl2的表达至29%。在注射Ccl2-siRNA的视网膜中，视网膜冷冻切片上的原位杂交和免疫组织化学显示Müller细胞内的Ccl2显著降低。细胞计数显示，与对照组相比，Ccl2 siRNA注入视网膜的视网膜血管和外核层中的ED1阳性和IBA1阳性细胞显著减少。此外，与对照组相比，Ccl2 siRNA注入的视网膜中的感光细胞凋亡明显减少。

结论：我们的数据表明，Müller细胞表达Ccl2可促进单核细胞/小胶质细胞的浸润，从而导致视网膜损伤后的神经炎症反应和光感受器死亡。使用siRNA调节过度的趋化因子反应可能有助于减少AMD等视网膜退行性疾病中炎症介导的细胞死亡。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
对照视网膜玻璃体内注射荧光标记小干扰RNA后的定位。（A）只有在昏暗光线下饲养的小鼠，注射了Invivefectamine的视网膜未检测到荧光。（B）孵育24小时后，观察到注射的siRNA的强荧光（红色），这在所有细胞层直到外核层（ONL）都是明显的。（C-I）siRNA（红色）和Müller细胞特异性蛋白S100β/vimentin（绿色）的双重免疫标记显示，siRNA与S100β/vimentin在Müler细胞过程中的共定位位于（C–F）ONL和外界膜（OLM）（箭头），以及（G–I）内核层（INL）（箭头）。GCL，神经节细胞层；IPL，内丛状层；OS，外段。
图2
图2
小干扰RNA注射和光损伤后，通过定量PCR测量视网膜中Ccl2的相对表达。在注射了Ccl2 siRNA的动物中，在BCL 24小时后，Ccl2的表达相对于仅Invivefectamine对照组显著下降至29.3%(P（P） < 0.05; 方差分析/Tukey检验），而注射干扰siRNA的动物中Ccl2的表达与仅注射Invivofectamine组相比没有明显变化（95.4%，P（P） < 0.05; 方差分析/Tukey检验）。仅Inivofeitamine（n=8），加扰siRNA（n=9），Ccl2 siRNA（n=6）。误差线代表SEM。*在P（P）<0.05，使用方差分析与Tukey's事后（post-hoc）测试。
图3
图3
趋化因子（C-C基序）配体（Ccl）2在M细胞中的表达üCcl2小干扰（si）RNA处理和光损伤后的ller细胞。(A类——C类)从上部中间边缘拍摄的代表性图像显示就地暴露于明亮的连续光（BCL；黑色箭头）后，位于内核层（INL）突起内Ccl2 mRNA的杂交结果。（D）感官对照组无特异性染色。（E–G）用荧光染色（红色）共同标记Ccl2mRNA显示波形蛋白免疫反应（绿色）Müller细胞过程的共定位（白色箭头）。直方图显示，Ccl2 siRNA处理组（12.6个细胞）的每个视网膜中表达Ccl2的Müller细胞数量显著减少，而仅Invivofectamine组（47.4个细胞；P（P） < 0.05）和打乱的siRNA（50.1个细胞；P（P） < 0.05）组。仅Inivofeitamine（n=4），加扰siRNA（n=四），Ccl2 siRNA（n=4）。误差线代表SEM。*在P（P）<0.05，使用方差分析与Tukey's事后（post-hoc）测试。ONL，外核层。
图4
图4
M中趋化因子（C-C基序）配体（Ccl）2蛋白的免疫反应性（IR）ü与Ccl2小干扰（si）RNA治疗相关的光损伤后的ller细胞。(A类——D类)来自上中周的代表性图像显示，在随后的内核层（INL）中，Ccl2（红色）在径向定向过程中表现出强烈的IR（A–C）BCL（白色箭头），而（D）阴性对照组无荧光。（E–G）Ccl2 IR显示S100B-免疫反应性（绿色）Müller细胞突起的强共定位（白色箭头）。每个视网膜的Ccl2-IR Müller细胞过程的量化直方图表明注射Ccl2-siRNA的动物数量显著减少（11.6，P（P） < 0.05）与仅注射Invivefectamine或加扰siRNAs的患者相比（分别为45.1和45.2）。仅Inivofeitamine（n=4）、加扰siRNA（n=四）、Ccl2 siRNA（n=4）误差条代表SEM。*P（P）<0.05，使用方差分析与Tukey's事后（post-hoc）测试。ONL，外核层。
图5
图5
在视网膜内注射趋化因子（C-C基序）配体（Ccl）2小干扰（si）RNA，用明亮连续光（BCL）治疗后，招募ED1和电离钙结合适配器分子（IBA）1阳性的单核细胞。（A-F）从上中周拍摄的代表性图像显示，在BCL后视网膜血管系统招募的ED1+/IBA1+细胞核中，ED1（绿色）和IBA1（红色）呈免疫反应性（箭头所示）。（G）BCL后Ccl2 siRNA注射视网膜中每个视网膜的ED1+/IBA1+核仁总数与单纯Invivotamine组和干扰siRNA对照组相比显著减少(P（P） < 0.05).（H）与对照组相比，注射Ccl2 siRNA的视网膜中招募到视网膜和脉络膜血管部位的ED1+/IBA1+细胞核数量减少(P（P） < 0.05). 仅Inivofeitamine（n=4）、加扰siRNA（n=四）、Ccl2 siRNA（n=4）误差条代表SEM。*P（P）<0.05，使用方差分析与Tukey's事后（post-hoc）测试。GCL，神经节细胞层；IPL，内部丛状层。
图6
图6
注射趋化因子（C-C基序）配体（Ccl）2小干扰（si）RNA的视网膜BCL后，对电离钙结合接合器分子（IBA）1阳性而对ED1阴性的小胶质细胞的招募。（A–F）在BCL 24小时后，外核层（ONL）和外丛状层（OPL）的分支ED1−/IBA1+核团中，来自上中周的代表性图像显示IBA1（红色）而非ED1（绿色）的免疫反应性(A类——C类; 箭头）。（G）BCL后注射Ccl2 siRNA的视网膜中，每个视网膜的ED1−/IBA1+募集细胞核总数显著减少，与仅Invivofectamine组和扰乱siRNA对照组相比(P（P） < 0.05).（H）与对照组相比，注射Ccl2 siRNA的视网膜中招募到OPL或ONL/视网膜下间隙的ED1−/IBA1+细胞核数量减少(P（P） < 0.05). 仅Inivofeitamine（n=4），加扰siRNA（n=四），Ccl2 siRNA（n=4）。误差线代表SEM。*在P（P）<0.05，使用方差分析与Tukey's事后（post-hoc）测试。INL，内核层；OS，外段。
图7
图7
通过末端dUTP缺口末端标记（TUNEL）和活化蛋白（AP）-1在注射趋化因子（C-C基序）配体（Ccl）2小干扰（si）RNA的视网膜中的表达定量BCL后的凋亡。（A–D）来自上中周边的代表性图像显示BCL暴露后siRNA处理组中主要位于ONL的细胞核的TUNEL（红色）。E： 注射Ccl2 siRNA的动物发现外核层（ONL）的TUNEL阳性细胞核数量显著减少（85.1，P（P） < 0.05; 方差分析/Tukey检验）与仅Invivefectamine组和干扰siRNA对照组在BCL 24小时后进行比较（分别为263.8和250.1）。（F）BCL后视网膜中AP-1的表达在注射Ccl2 siRNA的视网膜中减少到14.1倍(P（P） < 0.05），相比之下，仅Invivefectamine组和加扰siRNA对照组分别减少20.5倍和24.9倍。仅Inivofeitamine（n=8）、加扰siRNA（n=9）、Ccl2 siRNA（n=6）误差条代表SEM。*P（P）<0.05，使用方差分析与Tukey's事后（post-hoc）测试。NS，不显著。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. Bauer J，Sminia T，Wouterlood FG，Dijkstra CD。急性和慢性复发性实验性自身免疫性脑脊髓炎过程中巨噬细胞和小胶质细胞的吞噬活性。神经科学研究杂志，1994年；38:365–375. doi:10.1002/jnr.490380402。-内政部-公共医学
    1. Gupta N、Brown KE、Milam AH。人类视网膜色素变性、迟发性视网膜变性和年龄相关性黄斑变性中活化的小胶质细胞。2003年实验眼科研究；76:463–471. doi:10.1016/S0014-4835（02）00332-9。-内政部-公共医学
    1. Neumann H，Kotter MR，Franklin RJ。小胶质细胞清除碎片：退化和再生之间的重要联系。大脑。2009;132:288–295.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Penfold PL，Liew SC，Madigan MC，Provis JM。年龄相关性黄斑变性视网膜中主要组织相容性复合体II类表达的调节。投资眼科视觉科学。1997;38:2125–2133.-公共医学
    1. Penfold PL、Provis JM、Liew SC。人类视网膜小胶质细胞与树突状抗原呈递细胞共同表达表型特征。神经免疫杂志。1993;45:183–191. doi:10.1016/0165-5728（93）90179-3。-内政部-公共医学

出版物类型

MeSH术语

LinkOut-更多资源