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.2012年5月17日；53(6):3027-39.
doi:10.1167/iovs.11-8476。

缺乏视黄醇结合蛋白受体STRA6的小鼠视网膜中的类视网膜含量、视觉反应和眼部形态受到损害

阿尔贝托·鲁伊斯 1, 曼努埃尔·马克, 拥抱雅各布斯, 穆里尔·克洛芬斯坦, 简·胡, 马西娅·劳埃德, 萨默·哈比卜, Chinatsu Tosha公司, Roxana A Radu公司, 诺伯特·B·盖斯林克, 史蒂文·努西诺维茨, 迪安·博克
附属公司

缺乏视黄醇结合蛋白受体STRA6的小鼠视网膜中的类视网膜含量、视觉反应和眼部形态受到损害

阿尔贝托·鲁伊斯等。 投资眼科视觉科学. .

摘要

目的：我们报告了一种小鼠模型的建立，在该模型中，STRA6基因被功能性破坏，以便于研究STRA6蛋白缺乏情况下的视觉反应、眼部形态变化和维甲酸处理。

方法：生成了空鼠标行stra6-/-。Western Blot和免疫细胞化学检测STRA6蛋白的表达。对6周龄、5月龄和10月龄小鼠进行视觉反应和形态学研究。采用高效液相色谱法评估暗适应小鼠眼组织中的维甲酸含量。

结果：在STRA6-/-阴性小鼠中未检测到STRA6蛋白，其视觉反应持续减少，但未完全消融。小鼠在视网膜色素上皮（RPE）和神经感觉视网膜中的类视黄醇含量也显著减少，包括视网膜酯减少95%。在形态学水平上，与控制幼崽相比，由于视杆内外节缩短，神经感觉视网膜厚度减少，视杆a波和b波振幅相应减少。此外，锥体光感受器细胞数量和锥体b波振幅减少。斜视6/无眼的一个典型特征是存在持续的原发性肥大玻璃体，这是一种光学致密的血管结构，位于晶状体后表面和神经感觉视网膜之间的玻璃体房内。

结论：我们对stra6-/-null小鼠的研究确定了stra6蛋白在RPE摄取、细胞内转运和处理视黄醇方面的重要性。在没有它的情况下，视杆感光器内外节段长度减少，锥细胞数量减少，暗视和明视反应也减少。原发性玻璃体溶解也需要STRA6。然而，从这些研究中可以清楚地看出，STRA6并不是RPE摄取视黄醇的唯一途径。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露：A.鲁伊斯，无；M.马克，无；H.雅各布斯，无；M.Klopfenstein先生，无；J.Hu（胡锦涛），无；M.劳埃德，无；S.哈比卜，无；C.托沙，无；R.A.半径，无；N.B.盖斯林克，无；S.Nusinowitz公司，无；D.博克，无

数字

图1。
图1。
通过PCR对尾部活检的基因组DNA样本进行野生型和突变等位基因的基因分型，随后通过Western Blot分析确认RPE细胞中没有STRA6蛋白。(A类)包含包含外显子E3到E8的区域的基因组区域(带编号的实体框)的街道6野生型等位基因(顶部). 在stra6型零（L−）等位基因，包含外显子E5到E7的片段被一个LoxP位点（标记）取代，使得街道6基因非功能性(底部). 用于基因分型的DNA引物（P）的位置和方向用箭头表示。(B类)由中描述的引物组合获得的PCR扩增的代表性图像(A类). (C类)使用RPE细胞提取的Western Blot图像街道6−/−突变和WT控制。Immnuno检测采用针对小鼠STRA6 C末端肽的多克隆抗体和单克隆抗GAPDH作为内部对照。
图2。
图2。
眼睛直径的比较街道6−/−和WT小鼠。在3个不同年龄、6周、20周（5个月）和40周（10个月）收集眼球。在立体显微镜下记录测量结果。每个值表示每个WT中3-5个眼球的平均值stra6−/−小鼠组。
图3。
图3。
视网膜的组织学特征stra6型突变体和对照。(A类,B类)视网膜冰冻切片（10μm）街道6+/+和stra6−/−老鼠。STRA6染色采用来自abCam Inc.的抗STRA6抗体，稀释度为1:200。(C类,D类)来自两种基因型的视网膜1μm塑料切片的图像显示，缺乏STRA6的小鼠视网膜的外节和内节缩短(D类). (E类)沿视网膜整个范围测量外/内节厚度。视神经头（ONH）被用作区分上(正确的)和劣势(左边)半球。每个视网膜显示四个代表性视网膜的平均值街道6+/+和stra6−/−基因型。在每个半球测量八个不同的点。ONL，外核层。棒材，20μm。
图4。
图4。
6周龄儿童的典型眼底分析和光学显微镜图像stra6−/−显示鼠标。(A类,B类)IP注射荧光素后观察到两个不同焦平面中存在PHPV结构。通过血管的存在可以观察到这些结构的血管化(B类,箭头). (C类)PHPV结构的小行星状外观(A类)和(B类)标准眼底成像。(D类)Epon-Araldite矢状切面（1μm），显示PHPV体的内部特征，包括色素黑素细胞。
图5。
图5。
永存增生性原发性玻璃体的发生stra6−/−突变体。(A类–D类)E14.5和E18.5 WT胎儿矢状面组织切片的比较stra6−/−突变体(stra6−/−）. (E类–H（H）)6周龄WT和stra6−/−眼睛。C、 角膜；H、 玻璃样血管；五十、 透镜；ON，视神经；R、 视网膜。条形表示160μm(A类–F类).
图6。
图6。
5个月大婴儿的眼底和光学显微镜图像街道6老鼠。(A类,B类)眼底图像街道6−/−小鼠双眼均出现PHVP。(C类,D类)光学显微镜图像显示视网膜IS和OS长度减少街道6−/−小鼠与WT对照组相比。棒材，20μm。
图7。
图7。
典型的SD-OCT显示街道6+/+和stra6−/−6周龄和5个月龄小鼠。在低倍镜下拍摄5个月组的图像。6周龄小白鼠的下半部分显示，小行星状致密结构（PHVP）位于左眼（OS）和右眼（OD）视网膜层上方stra6−/−老鼠(箭头). 这些结构能够阻挡穿过视网膜的光路，产生阴影效果。然而，在5个月大的小鼠的下面板中，尽管双眼中都存在PHVP，但光路并没有被阻断，这可能是由于解剖定位和色素沉着程度的差异。
图8。
图8。
视网膜的组织学特征街道6突变体和对照。5个月大的视网膜冰冻切片（10μm）街道6+/+和stra6−/−小鼠显示在所有面板中。锥鞘染色(A类,C类)通过使用荧光标记的PNA（20μg/mL）获得。STRA6染色(A类)使用来自abCam Inc.的抗STRA6抗体进行1:200稀释。(B类,D类)是Nomarski控件的图像街道6+/+和stra6−/−，分别是。
图9。
图9。
6周龄儿童ERG分析街道6老鼠。在黑暗适应条件下记录各组小鼠对蓝闪刺激的ERG反应。阴影区域定义的法线范围一-和b-WT的波幅街道6+/+老鼠。杂合子的反应街道6+/−小鼠完全落在这个范围内，与正常视网膜功能一致。相反，ERG的反应来自stra6−/−小鼠明显更小一-和b-WT对照组和杂合子小鼠的波幅分别约为20%和50%。5个月大婴儿的ERG分析街道6小鼠表现出与6周龄小鼠相似的视觉反应（数据未显示）。
图10。
图10。
RPE和神经感觉视网膜中的维甲酸含量街道6基因型。降低所有-反式-在视网膜色素上皮和神经感觉视网膜中均观察到ROL街道6无鼠标(A类,D类). 这些突变体还显示所有-反式-RP和11-顺式-RPE中的RP(B类,C类)还有11个-顺式-RAL和所有-反式-神经感觉视网膜中的RAL(E类,F类). 每个值代表每个基因型组4个眼睛样本的平均值。所有样本均采集自6周龄婴儿stra6型老鼠。样品通过正相HPLC进行分析。全部-反式-ROL，全部-反式-视黄醇；全部-反式-RP，全部-反式-视黄基棕榈酸酯；全部-反式-RAL，全部-反式-视网膜；11-顺式-劳尔色卡，11-顺式-视网膜；11-顺式-RP，11-顺式-视黄基棕榈酸酯。
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