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.2012年1月10日；109(2):588-93.
doi:10.1073/pnas.1114966108。 Epub 2011年12月27日。

人巨细胞病毒激活ERK和髓细胞白血病-1蛋白与潜在感染细胞的存活相关

马修·李维斯 1, 阿巴盖尔·布列登斯坦, 特蕾莎·康普顿
附属公司

人巨细胞病毒激活ERK和髓细胞白血病-1蛋白与潜在感染细胞的存活相关

马修·李维斯等。 美国国家科学院程序. .

摘要

人类巨细胞病毒（HCMV）进入骨髓细胞并在骨髓细胞中建立潜伏感染的能力对人类的生存和传播至关重要。最初的病原体结合和进入触发了许多抗病毒反应，包括促凋亡细胞死亡途径的激活，这必须在潜伏期建立过程中加以应对。然而，在潜在HCMV感染后，髓系细胞的生存状态的机制仍然完全不明确。我们假设细胞抗凋亡机制必须首先被HCMV激活，以促进早期生存事件的发生。在这里，我们发现HCMV通过上调关键的髓细胞生存基因，即髓细胞白血病（MCL）-1蛋白，暂时保护非许可性髓细胞免受化学物质和病毒进入诱导的细胞死亡。MCL-1表达的诱导与病毒基因表达无关，但依赖于病毒糖蛋白B激活ERK-MAPK通路，抗体介导的糖蛋白B信号传导中和或针对MCL-1的shRNA表达均与病毒感染或化学刺激引起的细胞死亡增加相关。最后，我们发现ERK-MAPK信号的激活对造血细胞的长期潜伏期和再激活有影响。因此，HCMV为最初的病毒-细胞相遇启动髓样细胞。鉴于ERK和MCL-1对髓系细胞生存的重要性，在髓系祖细胞中成功建立HCMV潜伏期始于病毒进入点。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
HCMV可暂时保护髓细胞免受细胞死亡。(一)THP1（棒1-4），CD14+（钢筋5-8）或CD34+用DMSO（−）或25μM顺铂（+）2 hpi孵育感染（bars 9–12）的模拟（M）或HCMV（V）细胞4 h，然后在18 h后用台盼蓝染色检测细胞活力（n=3）。使用Student测量显著性t吨测试。(B类)CD14号机组+（钢筋1-4）或CD34+模拟（M）或UV-HCMV（UV）感染的（bars 5-8）细胞与DMSO（−）或25μM顺铂（+）2 hpi孵育4 h，然后在24 h后用TUNEL检测细胞凋亡。(C类)CD34型+24小时后用TUNEL分析模拟或HCMV感染的细胞，然后用25μM顺铂A在2至24 hpi孵育，以测量细胞凋亡。
图2。
图2。
HCMV上调MCL-1与细胞死亡保护相关。(一和B类)分析模拟（M）和HCMV（V）感染的THP1细胞4hpi细胞中MCL-1和GAPDH蛋白的表达(一)CD34中分析了0–24 hpi+HCMV感染细胞(B类). 密度测定显示了模拟的比率变化。(C类)用模拟（M）或非靶向（NT）或shMCL-1表达（MCL）慢病毒载体转染THP1细胞24小时后，对其进行MCL-1和GAPDH表达的Western blot。(D类)首先用非靶向（bars 1-4）或shMCL-1表达（bars 5-8）慢病毒载体转导THP1细胞24小时，然后模拟或HCMV感染。在2 hpi时，将其与二甲基亚砜或顺铂A孵育4 h。在新鲜培养基中进行抢救后，在顺铂A治疗18 h后通过台盼蓝染色检测细胞活力。
图3。
图3。
HCMV介导的细胞死亡保护是gB依赖性的。(一)添加配体2小时后，用模拟（bars 1和2）、HCMV（bars 3和4）、HCM+CFI02（bars 5和6）或重组gB（bars 7和8）、DLD（bars 9和10）或gH/gL（11和12）蛋白孵育的THP1细胞与DMSO或顺铂A孵育。18小时后，用台盼蓝染色检测细胞死亡。(B类)RT-PCR检测与模拟、HCMV、HCMV+CFI02、重组gB、DLD或gH/gL蛋白孵育2 h的THP1细胞中MCL-1和肌动蛋白的表达(C类)使用预先培养有抗-gH（bars 1-4）或抗-gB（bars 5-8）抗体的培养基（M）或HCMV（V）感染CD34+细胞在4 hpi时与0.1%二甲基亚砜（−）或顺铂A（+）孵育3 h，然后在新鲜培养基中复苏。TUNEL染色24 hpi检测细胞死亡。(D类)早期与抗gB或同型对照培养后，对模拟或HCMV感染者的MCL-1蛋白表达进行Western blot分析。密度测定显示了模拟的比率变化。
图4。
图4。
在混合细胞群中诱导细胞死亡可促进基因组阳性细胞的富集。(一)CD34型+电池（3×105)用顺铂（+）或二甲基亚砜（-）进一步孵育模拟（M）或HCMV（V）感染者3 hpi。再过4小时后，将细胞接种在新鲜培养基中并培养72小时。通过台盼蓝测定活力。误差条表示从三个独立实验中获得的三次重复计数。(B类)在3、24和72 hpi时从培养物中提取DNA，在IE和GAPDH PCR后，通过密度测定法分析条带，以量化病毒和细胞DNA含量。该比率表示为3小时的倍数增加。误差条表示对代表性实验的三次分析(n个= 3).
图5。
图5。
抑制ERK–MAPK信号阻断HCMV诱导的MCL-1上调和细胞存活。(一)CD34型+用二甲基亚砜或ERK可逆抑制剂或p38抑制剂信号培养1h的细胞被模拟（−）或HCMV（+）感染。在3 hpi时，将细胞保存在新鲜培养基中，然后在进一步培养24小时后进行TUNEL染色。(B类)CD34中MCL-1表达的4hpi蛋白质印迹分析+用二甲基亚砜或ERK或p38信号抑制剂预处理的细胞模拟（M）或HCMV感染。(C类)对感染CD34的DNA进行PCR+细胞4和120hpi用ERK抑制剂或非活性类似物预处理1h，细胞与病毒DNA的比率表示为模拟对照的百分比。(D类)对来自潜在感染CD34的成熟树突状细胞的RNA进行UL123和肌动蛋白表达的RT-PCR+感染时在ERK抑制剂或非活性类似物（IA）中瞬时培养的细胞。
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