跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2012年3月；81(3):356-65.
doi:10.1124/mol.111.075648。 Epub 2011年11月23日。

用新型丝氨酸类似物确定丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运体2（ASCT2）配体的底物和阻断剂活性

托马斯·阿尔伯斯 1, 威廉·马西利亚, 塔妮娅·托马斯, 阿曼达·加梅罗, 克里斯托夫·格雷沃
附属公司

用新型丝氨酸类似物确定丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运体2（ASCT2）配体的底物和阻断剂活性

托马斯·阿尔伯斯等。 分子药理学. 2012年3月.

摘要

中性氨基酸转运蛋白丙氨酸-半胱氨酸转运蛋白2（ASCT2）属于溶质转运蛋白的溶质载体1（SLC1）家族，可跨膜转运小的中性氨基酸，包括生理上重要且普遍存在的氨基酸谷氨酰胺。由于缺乏对ASCT2药理学的了解以及缺乏高亲和力抑制剂，我们对ASCT2参与谷氨酰胺生理过程的理解受到了阻碍。在本研究中，我们将电子对接方法与结合参数的实验研究相结合，以开发新的ASCT2抑制剂和底物，一系列丝氨酸酯，并确定控制其功能效应的结构参数。该系列化合物是使用标准方法合成的，具有从抑制剂到部分底物和全底物的一系列性质。我们的结果表明，侧链体积小、侧链疏水性低的氨基酸衍生物与结合位点的闭环形式强烈相互作用，其中重入环2（底物结合位点的假定细胞外门）被关闭。然而，这些衍生物与开环形式（外门向细胞外侧开放）结合较弱，充当转运底物。相反，抑制剂优先与开环形式结合。侧链中的芳香残基是高亲和力相互作用所必需的。其中一种化合物，1-丝氨酸酯-丝氨酸联苯-4-羧酸盐以30μM的表观亲和力可逆地抑制ASCT2功能。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
A、 Glt天然天冬氨酸配体的叠加酸碱度 2NWX公司结构（粉红色配体）我-Autodock Vina预测的天冬氨酸复合物（基于2NWX公司，绿色配体）。B、 叠加我-Ser（绿色）和我-Asn（黄色）配体对接到ASCT2（2NWX）同源模型（灰色结构）。具有结合配体的GltPh2NWX结构；Asp（粉红色），显示为绿松石色。距离配体4Å的氨基酸侧链突出显示为线条。
图2。
图2。
总结了本研究中使用的氨基酸底物和抑制剂的结构，并总结了合成程序。
图3。
图3。
A、 Glt天然TBOA配体的叠加酸碱度 2西北偏西结构（绿松石配体）我-Autodock Vina预测的Bzl-Ser复合物（姿势5）（基于第2周同源模型，灰色配体）。B、 预测抑制剂结合位点的表面表征。
图4。
图4。
A、 在灰色条指示的时间和浓度下，将全部和部分底物应用于ASCT2所引发的内向阴离子电流的原始痕迹。减去基线电流。膜电位为0 mV，细胞内溶液含有10 mM丙氨酸和135 mM NaSCN。细胞外溶液含有140 mM NaMes。B、 两种底物（■，4c类，异丙基-；○,第6页c，乙基）。实线表示根据Michaelis-Menten方程进行的拟合。
图5。
图5。
A、 在灰条指示的时间和浓度下，应用丙氨酸引起的向内阴离子电流的原始迹线（左迹线）和应用抑制剂抑制ASCT2的泄漏阴离子电流。减去基线电流。膜电位为0 mV，细胞内溶液含有10 mM丙氨酸和135 mM NaSCN。细胞外溶液含有140 mM NaMes。B、 两种抑制剂的剂量反应曲线(2厘米和3立方厘米). 实线表示根据Michaelis-Menten方程进行的拟合。C、，3立方厘米抑制对200μM丙氨酸的电流响应（如A中的离子条件）。D、 抑制常数，K（K）我，用于丝氨酸联苯-4-羧酸盐(5厘米)不同浓度的丙氨酸。根据方程式1，虚线表示竞争抑制的预期关系。显示两行的事实反映了K（K）米测定丙氨酸。E、 在两种抑制剂存在的情况下抑制电流(5厘米)和丙氨酸（此处显示200μM丙氨酸），等式2用于拟合数据。
图6。
图6。
抑制剂解离动力学。A、 从只含有细胞外缓冲液（对照，黑点）的溶液到含有缓冲液+2 mM丙氨酸的溶液的快速溶液交换，如条形图所示（顶部）。红点显示类似的实验，其中用1mM预培养细胞3立方厘米.随后应用丙氨酸会导致3立方厘米，允许测定解离动力学。减去基线电流。膜电位为0mV，细胞内溶液含有10mM丙氨酸和135mM NaSCN。细胞外溶液含有140 mM NaMes。B、 指数拟合的时间常数量化在A中显示为实线。注意，丙氨酸激活电流的时间常数受到溶液交换时间常数的限制。
图7。
图7。
ASCT2配体的构效关系。表观解离常数[log（1/K）]对侧链取代基（A）体积和取代基（B）的log（P）的依赖性。取代基被定义为所有侧链原子，从C开始β，不包括Cα以及α羧基和氨基。基板显示为开放符号，抑制剂显示为填充符号。P、 辛醇-水分配系数。
图8。
图8。
预测底物、部分底物或抑制剂行为：阴离子电流的方向与侧链体积成比例。阴离子电流响应是相对于饱和丙氨酸浓度（均为0 mV）引起的响应进行计算的。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Abele R、Svergun D、Keinänen K、Koch MH、Madden DR（1999）。在有无激动剂的情况下，谷氨酸受体配体结合域的分子包膜。生物化学38:10949–10957-公共医学
    1. Armstrong N，Gouaux E.（2000）AMPA敏感谷氨酸受体的激活和拮抗机制：GluR2配体结合核心的晶体结构。神经元28:165–181-公共医学
    1. Arriza JL，Kavanaugh MP，Fairman WA，Wu YN，Murdoch GH，North RA，Amara SG.（1993）克隆和表达与谷氨酸转运体基因家族结构相似的人类中性氨基酸转运体。生物化学杂志268:15329–15332-公共医学
    1. Bass R、Hedegaard HB、Dillehay L、Moffett J、Englesberg E.（1981）中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1）氨基酸转运的A、ASC和L系统。生物化学杂志256:10259–10266-公共医学
    1. Bendahan A，Armon A，Madani N，Kavanaugh MP，Kanner BI.（2000）精氨酸447在神经元谷氨酸转运体的底物相互作用中起着关键作用。生物化学杂志275:37436–37442-公共医学

出版物类型