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.2011年10月;38(7):4237-43.
doi:10.1007/s11033-010-0442-2。 Epub 2011年7月14日。

肌氨酸诱导雄激素依赖性前列腺癌细胞HER2/neu表达增加

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肌氨酸诱导雄激素依赖性前列腺癌细胞HER2/neu表达增加

马林·达尔等人。 分子生物学代表. 2011年10月.

摘要

越来越多的证据表明,人类表皮生长因子受体2(HER2/neu)参与前列腺癌的进展。最近,据报道,肌氨酸在前列腺癌进展过程中高度增加,外源性肌氨酸可诱导良性前列腺上皮细胞的侵袭性表型。本研究的目的是研究肌氨酸对前列腺癌细胞株LNCaP(雄激素依赖性)、PC-3和DU145(均为雄激素非依赖性)HER2/neu表达的影响。使用RT-qPCR测定HER2/neu和雄激素受体(AR)转录物的相对量。通过Western blot(WB)证实HER2/neu的总表达。用HER2/neu特异性荧光探针通过共焦显微镜观察活LNCaP细胞表面的HER2/neu蛋白。LNCaP细胞暴露于50μM肌氨酸24小时后,HER2/neu mRNA水平增加58%(P<0.001),表明肌氨酸在转录水平上影响HER2/neu的表达。用肌氨酸异构体丙氨酸进行的对照实验表明,对HER2/neu转录没有显著影响。WB和共聚焦显微镜显示,暴露于肌氨酸48小时后,HER2/neu mRNA的上调先于蛋白质水平的相应增加。有趣的是,肌氨酸对HER2/neu的活化(磷酸化)形式没有影响。暴露于肌氨酸后,AR表达无明显变化。这是第一份表明肌氨酸参与调节癌蛋白HER2/neu的报告。因此,肌氨酸可能通过增加HER2/neu的表达而诱导前列腺癌的进展。然而,有关细胞机制的详细信息仍有待阐明。

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数字

图1
图1
肌氨酸对前列腺癌细胞HER2/neu mRNA相对水平的影响。(a) LNCaP细胞暴露于25-100μM肌氨酸或50μM丙氨酸24小时;(b) 将雄激素依赖型(LNCaP)和雄激素依赖性(PC-3和DU145)暴露于50μM肌氨酸24小时。黑色、灰色和白色条分别代表不添加肌氨酸、肌氨酸和丙氨酸的对照实验。显示了至少三个独立实验的平均值。错误条显示SD,星号表示明显的折叠变化(P(P)<0.001,由学生的t检验确定)
图2
图2
肌氨酸对LNCaP细胞HER2/neu蛋白表达和磷酸化的影响。肌氨酸(50μM)处理48和72小时后,LNCaP细胞HER2/neu蛋白表达上调(a)。这些数字表明HER2/neu蛋白带的检测强度相对增加。磷酸化形式HER2/neu-P没有增加(b)。50μM肌氨酸暴露6、24、48或72小时后LNCaP总蛋白提取物的Western blot分析;±S分别表示肌氨酸和对照细胞的添加
图3
图3
HER2/neu在活LNCaP细胞表面的表达。用50μg/ml Z(HER2)-红[10](红)探测肌苷处理(a)48和(b)72h后活细胞表面的HER2/neu细胞外部分;箭头表示HER2/neu-bound探针局部增加。比例尺=20μm。显示了五个独立实验的代表性图像
图4
图4
肌氨酸对LNCaP细胞雄激素受体(AR)的表达没有明显影响。(a) 肌苷治疗24和48小时后LNCaP细胞中AR mRNA的相对水平。黑色和灰色条分别表示控制细胞和处理细胞。显示了至少三个独立实验的平均值;误差条显示SD;(b) 肌苷作用24和48小时LNCaP细胞全细胞提取物的Western blot分析

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