It's all in the crystals…

doi:10.1107/S0907444911007797

.2011年4月；67（第4部分）：243-8。

doi:10.1107/S0907444911007797。 Epub 2011年3月18日。

都在水晶里…

齐格蒙特·S·德雷温达¹

附属公司

PMID： 21460442
预防性维修识别码：项目经理3069739
内政部： 10.1107/S0907444911007797

都在水晶里…

齐格蒙特·S·德雷温达. 晶体生物学学报. 2011年4月.

.2011年4月；67（第4部分）：243-8。

doi:10.1010/S0907444911007797。 Epub 2011年3月18日。

作者

齐格蒙特·S·德雷温达¹

附属

¹美国弗吉尼亚州夏洛茨维尔弗吉尼亚大学分子生理学和生物物理系，邮编：22908-0793。zsd4n@virginia.edu

PMID： 21460442
预防性维修识别码：项目经理3069739
内政部： 10.1107/S0907444911007797

摘要

高分子晶体学依赖于单晶的可用性和质量；这些通常是通过广泛筛选获得的，其固有成功率很低。结晶并不是一个完全随机的过程，许多蛋白质由于其分子表面的特殊微观特征而不屈服于结晶。因此，通过定点诱变进行合理的表面工程应该可以系统地显著提高结晶成功率。在这里，我们讨论了一种已经确立的策略，即表面熵减少（SER），包括其成功之处、局限性和未来可能的发展。

PubMed免责声明

数字

图1
的晶体结构*大肠杆菌*EscJ蛋白是III型分泌的分子平台，使用带有SER表面工程（PDB条目）的晶体解决1年7月; 是的等。, 2005 ▶). (一)不对称单元EscJ四聚体（每个亚基的颜色不同）的含量，溶剂暴露环中三个突变（E62A、K63A、E64A）的位置由箭头指示；通过诱变引入的三种丙氨酸显示为品红色球体。(b条)将EscJ蛋白组装成24单位环上部结构，代表II型分泌系统组装的早期阶段（Yip等。, 2005 ▶). 请注意，突变的补丁调解了唯一的晶体触点，由六倍螺旋轴6复制₅，垂直于图的平面。

图2
SER工程获得的晶体中常见的两种接触类型(一)在PDZ-RhoGEF（PDB条目）的RGSL域中创建结晶二聚体的同型对称接触1小时; 朗格内克等。, 2001 ▶). 取代Lys463、Glu465和Glu466的丙氨酸显示为品红色球体。双轴垂直于图纸平面。(b条)介导假定NTP焦磷酸化酶（PDB条目）的非结晶二聚体之间相互作用的异型接触（箭头）3n77号). 二聚体界面由野生型表面介导。

图3
RhoGDI（Cooper）的选定突变体在PEG 6000中的溶解度数据等。, 2007 ▶) 按照科恩方程，对数标度绘制*c（c）* _第页 = B类−*Kc公司*，其中*c（c）* _第页是蛋白质浓度，*c（c）*是沉淀剂浓度，B类是理想的蛋白质溶解度*c（c）*=0和*K（K）*是一个蛋白质依赖常数。对于所有突变体，PEG 6000中的溶解度系统性降低，并遵循Trevino观察到的模式等。(2007 ▶). 重要的是*K（K）*参数看起来没有变化，所以溶解度线近似平行。丙氨酸取代赖氨酸只会导致溶解度略有下降；当引入苏氨酸时，效果更显著，而酪氨酸的影响最大。用丙氨酸取代戊二酸会导致溶解度显著降低。在pH 8.0（缓冲）的室温下测量溶解度，作为PEG 6000浓度的函数。

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