跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2011年1月；300（1）：H162-72。
doi:10.1152/ajpheart.00650.2010。 Epub 2010年10月29日。

VE-cadherin的磷酸化通过p120-catenin偶联和Rac1活化控制内皮表型

Kunihiko Hatanaka公司 1, 迈克尔·西蒙斯, 村上雅弘
附属机构

VE-cadherin的磷酸化通过p120-catenin偶联和Rac1活化控制内皮表型

Kunihiko Hatanaka公司等。 美国生理学杂志心脏循环生理学. 2011年1月.

摘要

为了确定血管内皮（VE）-钙粘蛋白在内皮细胞功能调节中的作用，我们研究了试图参与p120-catenin结合的VE-cadherin位点磷酸化对血管通透性和内皮细胞迁移的影响。为此，我们将野生型VE-cadherin或Y658拟磷酸（Y658E）或去磷酸（Y650F）VE-caderin突变构建物引入缺乏内源性VE-cadherin的内皮细胞系（大鼠脂肪垫内皮细胞）。值得注意的是，由于p120-catenin优先结合N-cadherin，野生型和Y658E VE-cadherin在细胞间接触中均未被保留，导致N-cadherin靶向细胞间连接，VE-cadherin被排除，Y658F VE-cadherin能够结合p120-catenin并定位在粘附连接处取代N-cadherin。这导致屏障功能增强，Rac1活化和跛足形成完全消失，从而抑制细胞迁移。这些发现表明，VE-cadherin通过调节Y658磷酸化，与N-cadherin竞争连接定位，并控制血管通透性和内皮细胞迁移。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
Y658F突变体定位于粘附连接处。固定表达野生型血管内皮细胞钙粘蛋白（VEC-WT）、Y658E或Y658F突变体的大鼠脂肪垫内皮细胞（RFPEC），并用免疫荧光法测定绿色荧光蛋白（GFP）标记的VE-cadherin和N-钙粘蛋白的表达模式。对细胞进行VE-cadherin（红色）和N-cadherin（蓝色）染色。A类：在RFPEC中，未检测到内源性VE-cadherin，N-cadherin形成细胞间接触。B类：VEC-WT没有集中在细胞-细胞连接处。C类和D类Y658F突变体明显定位于细胞-细胞连接处，而Y658E突变体在细胞边界上没有均匀排列，细胞质分布增加。比例尺=10μm。E类：VEC-WT在RFPEC中被蛋白质降解。对表达VEC-WT、Y658E或Y658F突变体的融合RFPEC的总细胞裂解液进行SDS-PAGE，然后用所示抗体进行免疫印迹（IB）。抗VE-cadherin的抗体识别VE-cadherin的细胞质尾部。
图2。
图2。
敲除N-钙粘蛋白可恢复VE-钙粘蛋白在粘连连接处的定位。A类：用N-钙粘蛋白小干扰RNA（siRNA）处理表达VEC-WT的RFPEC。48小时后，用放射免疫沉淀分析缓冲液收集总细胞裂解物，并进行SDS-PAGE，然后用识别VE钙粘蛋白细胞质尾部的VE钙粘蛋白抗体进行免疫印迹。Y658F VE钙粘蛋白作为对照。B类和C类：用N-钙粘蛋白siRNA处理表达VEC-WT的RFPEC并固定，用免疫荧光法测定GFP标记的VE-cadherin、N-钙粘素和p120-catenin的表达模式。细胞被VE-cadherin（红色）、N-cadherin（蓝色；B类)和p120-catenin（蓝色；C类). 比例尺=10μm。
图3。
图3。
VE-cadherin的Y658F突变保持了细胞单层的完整性。内皮单层通透性用电细胞-基质阻抗传感（ECIS）系统评估。细胞完全融合后，每隔5分钟测量一次阻抗，持续8小时。代表性数据(A类和C类)ECIS的6个单独测量值的量化(B类和D类)如图所示。A类和B类：Y658E突变降低了细胞单层阻抗。C类和D类：用N-cadherin siRNA处理细胞后，测量细胞单层阻抗。注意，Y658F突变体保持高阻抗。数据为平均值±SDn个= 6. *P（P）<0.05 byt吨-测试。
图4。
图4。
Y658F突变体与p120-catenin相关，但与Y658E无关。A–D：固定表达VEC-WT、Y658E或Y658F突变体的RFPEC，并通过免疫荧光测定GFP标记的VE-cadherin和p120-catenin的表达模式。细胞被VE-cadherin（红色）和p120-catenin（蓝色）染色。注意，Y658F突变体明显与p120-catenin共定位（如箭头所示D类). 比例尺=10μm。E类和如果：表达VEC-WT、Y658E或Y658F突变体的RFPEC被裂解，p120连环蛋白(E类)或VE-cadherin(如果)免疫沉淀（IP）。免疫沉淀物经过SDS-PAGE，然后用所示抗体进行免疫印迹。G公司：裂解表达VE-cadherin-GFP（WT、Y658E或Y658F）的人脐静脉内皮细胞，并使用抗GFP抗体免疫沉淀VE-cadherin-GFP。免疫沉淀物经过SDS-PAGE，然后用所示抗体进行免疫印迹。注意，Y658E突变破坏了VE-cadherin-p120-catenin的关联。
图5。
图5。
Y658F突变破坏细胞迁移，而Y658E突变足以促进迁移反应。6孔板中的细胞汇合培养。使用200μl尖端进行划痕，并允许细胞迁移16小时。A类：0和16小时的代表性图片。B类：使用ImageJ软件测量相对间隙闭合。数据为平均值±SDn个= 8. *P（P）<0.01 byt吨-与RFPEC或Y658E进行比较。C类和D类：Y658F损伤了lamellipodia的形成。C类：使用Alexa Fluor 568-结合的指骨肽，用肌动蛋白（红色）对迁移前沿表达Y658E或Y658F的RFPEC进行染色。比例尺=10μm。D类：计数伤口边缘有跛足的细胞数。数据为平均值±SDn个= 8 *P（P）<0.01 byt吨-测试。
图6。
图6。
Y658F细胞中Rac1活性受损。A类,顶部：在Rac1活性测定之前，RFPEC在0.5%FBS-DMEM中培养24小时。细胞在裂解前用50 ng/ml IGF处理10 min。Rac1在对照细胞和Y658E VE-cadherin表达细胞中被IGF激活，但在Y658F细胞中未被激活。A类,底部：免疫印迹的密度分析。数据为平均值±SDn个= 4. *P（P）<0.05 byt吨-测试。B类,顶部：在10%FBS-DMEM中培养的RFPEC在达到50%汇合时进行Rac1活性测定。表达Y658F VE-cadherin的细胞与对照细胞或Y658E细胞相比，Rac1活性降低。（使用空载体转染的RFPEC作为对照。）B类,底部：免疫印迹的密度分析。数据为平均值±SDn个= 4. *P（P）<0.05 byt吨-测试。C类：迁移前沿的细胞用GTP-结合Rac1抗体染色（红色）。注意，活性Rac1在Y658F细胞的迁移前沿没有定位。白线表示前面的单元格边缘。比例尺=5μm。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Abe K，Takeichi M.EPLIN介导钙粘蛋白-连环蛋白复合物与F-肌动蛋白的连接，并稳定环向肌动蛋白带。美国国家科学院院刊105:13-19，2008-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Abraham S、Yeo M、Montero-Balaguer M、Paterson H、Dejana E、Marshall CJ、Mavria G.VE-Cadherin介导的细胞-细胞相互作用通过MLC2磷酸化信号抑制发芽。Curr Biol 19:668–6742009年-公共医学
    1. Adam AP、Sharenko AL、Pumiglia K、Vincent PA。Src诱导的VE-卡德林酪氨酸磷酸化不足以降低内皮单层的屏障功能。生物化学杂志285:7045–70552010-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Anastasiadis私人有限公司。p120-ctn：通过Rho-GTP酶进行上下文信号传递的连接。Biochim Biophys Acta 1773:34-462007年-公共医学
    1. Baumeister U、Funke R、Ebnet K、Vorschmitt H、Koch S、Vestweber D。Csk与VE-cadherin的相关性和细胞增殖抑制。EMBO J 24:1686–16952005年-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语

LinkOut-更多资源