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.2010年8月；52(2):612-22.
doi:10.1002/hep.23679。

人类免疫缺陷病毒（HIV）-1感染人类肝星状细胞并促进I型胶原和单核细胞趋化蛋白-1的表达：在HIV/丙型肝炎病毒诱导的肝纤维化发病机制中的意义

安娜·C·图亚马 1, 冯红, 叶迪迪亚·塞曼, 王传生, 德里亚·奥兹科克, Arevik Mosoian公司, 陈平（Ping Chen）, 本杰明·K·陈, 玛丽·E·克罗特曼, Meena B Bansal公司
附属公司

人类免疫缺陷病毒（HIV）-1感染人类肝星状细胞并促进I型胶原和单核细胞趋化蛋白-1的表达：在HIV/丙型肝炎病毒诱导的肝纤维化发病机制中的意义

安娜·C·图亚马等。 肝病学. 2010年8月.

摘要

与仅感染HCV的患者相比，同时感染人类免疫缺陷病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）的患者纤维化速度更快。在HIV/HCV复合感染患者中，纤维化进展与HIV RNA水平相关，表明HIV在肝纤维化形成中起着直接作用。趋化因子（C-C基序）受体5（CCR5）和半胱氨酸-X-半胱氨酸受体4（CXCR4）是HIV进入细胞所需的两个主要共受体，它们在肝内主要纤维生成细胞类型的活化肝星状细胞（HSC）上表达。因此，我们检查了HIV是否会感染造血干细胞，探索了病毒进入的潜在机制，并评估了感染的影响，这反映在造血干细胞将病毒转移到T淋巴细胞并引发促炎和促纤维化反应的能力上。我们报告说，实验室适应病毒HIV-IIIB（CXCR4-tropic或X4）和HIV-BaL（CCR5-tropic or R5）以及原始HIV分离物可以感染人类星状细胞系LX-2和原始人类HSC。在存在或不存在反转录酶抑制剂叠氮胸苷的情况下，使用HIV-绿色荧光蛋白（GFP）表达病毒构建物确认HSC中的HIV进入和基因表达。使用荧光激活细胞分选和免疫荧光染色证明CD4在原发性造血干细胞亚群上的表达。存在抗CD4、抗CXCR4和抗CCR5的阻断实验表明，HIV进入HSC主要是CD4/趋化因子辅受体依赖性。HIV感染促进了HSC I型胶原的表达和促炎细胞因子单核细胞趋化蛋白-1的分泌。此外，感染的LX-2细胞能够在共培养系统中将表达GFP的病毒转移到T淋巴细胞。

结论：综上所述，我们的结果表明，HIV通过对HSC的影响在肝纤维化/炎症中发挥潜在作用。早期高活性抗逆转录病毒治疗在HIV/HCV复合感染患者中的作用值得进一步研究。

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数字

图1
图1
HSC允许HIV感染在体外LX-2细胞和原代HSC（第3代）感染HIV-IIIB（X4-tropic）、HIV-BaL（R5-tropic。感染后第7天，（A，B）LX-2和原发性（C-F）HSC中均观察到显著的p24。显示了至少三个独立实验的代表图。数值表示为治疗细胞与模拟感染细胞的平均p24（pg/mL）±标准偏差(P（P）< 0.05).
图2
图2
人类HSC支持HIV进入和基因表达。（A） HIV-1 Gag-iGFP是一种基于NL4-3的HIV-1分子克隆，携带GFP插入MA和CA结构域之间的Gag中，HIV-NL-GI（GFP-IRES）是一种以NL4-3为基础的HIV-2分子克隆，以GFP取代nef起始密码子，通过插入一个内部核糖体进入位点恢复nef表达。用HIV-1GFP构建体感染原代HSC，无论是否与逆转录酶抑制剂AZT预孵育，并使用荧光显微镜每天监测GFP的表达。（B） 暴露于X4-tropic和X4-trophic后48-72小时，观察到GFP表达艾滋病毒NL-GI和HIV Gag-iGFP病毒构建物表明病毒进入以及早期和晚期基因表达。此外，与逆转录酶抑制剂AZT预孵育阻断了星状细胞中HIV-GFP基因的表达（放大倍数×40）。（C） FACS证实AZT存在时GFP+细胞减少。（D） 三个独立实验的结果以图形方式显示**P（P）< 0.008. （E，F）Brightfield显微镜（E）和MTS分析（F）证实AZT缺乏毒性。
图3
图3
HIV进入HSC主要是CD4依赖性的。（A） 通过免疫染色检测原代HSC的CD4表达，揭示CD4+细胞的亚群。显示了一幅代表性图像（放大倍数×45）。（B） 为了确定HSC的HIV感染是否依赖于CD4和趋化因子辅助受体CXCR4，在暴露于嗜X4型HIV-IIIB前30分钟，将原代HSC与抗CD4（克隆Leu 3a，BD Biosciences）、抗CXCR4（克隆12G5，R&D Systems）或各自的同种型对照抗体（均为10mg/mL）预孵育，感染后7天采集上清液检测p24。（C） 通过同时感染原代T细胞证实了阻断抗体的有效性*P（P）< 0.002. **P（P）< 0.001. ***P（P）< 0.0004. ****P（P）< 0.0006. 显示了至少三个独立实验的代表性数据，这些实验一式三份。（D） 在暴露于HIV-GI GFP之前，也用抗CXCR4和抗CD4抗体对原发性HSC进行预处理，感染后约3天进行FACS GFP表达。抗CXCR4或抗CD4未显著阻断GFP的表达。虽然抗CD4抗体略微降低了GFP的表达，但与同型对照组的效果并无不同。同样，抗CCR5抗体也不能阻止R5-GFP病毒感染HSC（数据未显示）。显示了三个独立实验的代表性数据。
图4
图4
HIV感染HSC培养上清液中释放的HIV对TZM细胞和CD4 T淋巴细胞无感染性。原发性HSC在37°C下感染HIV-IIIB（moi为0.5）4小时，并进行广泛清洗，并覆盖新鲜培养基。（A，B）收集到第7天的培养上清液与CD4细胞孵育用于p24分析（A），与TZM细胞孵养用于荧光素酶活性分析（B）。纯化的HIV-IIIB和感染CD4细胞的培养上清液均作为阳性对照，其中p24随时间增加反映了CD4细胞中正在进行的活跃复制（A）(*P（P）< 0.0003, **P（P）<0.01），TZM细胞中荧光素酶活性的增加反映了HIV-1启动子的激活（B）(***P（P）< 0.004,#P（P）< 0.02). 使用来自感染HSC的上清液未观察到明显的p24或荧光素酶活性。模拟感染细胞作为阴性对照。
图5
图5
HSC能够在共培养系统中将感染性病毒颗粒转移到TZM细胞和MT4淋巴细胞。（A） 用于共培养，5×104感染前1天，将TZM细胞/孔接种到12孔培养板上。HSC要么被模拟感染，要么在37°C下以0.5 moi感染HIV-IIIB 4小时。感染后，清洗细胞以去除未结合病毒，胰蛋白酶化，并以1:1的比例将其接种到TZM细胞上。细胞共培养72小时，裂解并分析荧光素酶活性。与HIV感染的HSC共同培养的TZM细胞中，荧光素酶活性平均增加了八倍****P（P）< 0.0007. 显示了至少三个独立实验的代表性数据，这些实验一式三份。（B） 模拟感染LX-2细胞或感染HIV NL-GI GFP 24小时。病毒孵育后，对细胞进行广泛清洗并再培养24小时。随后，对细胞进行胰蛋白酶消化，并将其置于单独的培养板中。细胞贴壁后，在有无AZT的情况下将MT4细胞加入培养板。共培养36到48小时后，与感染的LX-2细胞共培养的MT4细胞GFP表达逐渐呈阳性，这被AZT阻断。
图6
图6
HIV促进HSC I型胶原的表达和MCP-1的分泌。原发性HSC（第3代）需要24小时的血清饥饿，在37°C下感染HIV-IIIB 4小时，广泛清洗，并覆盖新鲜培养基。（A） 在感染后24小时和48小时制备的细胞裂解物上进行I型胶原的蛋白质印迹。（A） 在24小时和48小时时，I型胶原的表达分别增加了1.5倍和2.7倍。β-管蛋白被用作蛋白质负荷控制，与控制相比的倍数增加以任意单位表示。（B） 用ELISA法收集培养上清进行MCP-1检测。HSC暴露于HIV-IIIB 48小时后，MCP-1分泌平均增加80倍(**P（P）< 0.0004). 显示了两个独立实验的代表性数据。
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  • 向HIV-1贮存器输送CRISPR。
    Gurrola TE、Effah SN、Sariyer IK、Dampier W、Nonnemacher MR、Wigdahl B。 Gurrola TE等人。 前微生物。2024年5月15日；15:1393974. doi:10.3389/fmicb.2024.1393974。eCollection 2024年。 前微生物。2024 PMID：38812680 免费PMC文章。 审查。
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    1. Sherman KE、Rouster SD、Chung RT、Rajicic N.人类免疫缺陷病毒感染者的丙型肝炎病毒流行率：美国成人艾滋病临床试验组的横断面分析。临床传染病。2002;34:831–837.-公共医学
    1. Thomas D、Astemborski J、Rai R、Anania F、Schaeffer M、Galai N等。丙型肝炎感染的自然史：宿主、病毒和环境因素。JAMA公司。2000;284:450–456.-公共医学
    1. Bonacini M、Govindarajan S、Blatt L、Schmid P、Conrad A、Lindsay K。联合感染人类免疫缺陷病毒和丙型肝炎病毒的患者，其肝脏HCV RNA水平较高。病毒性肝炎杂志。1999;6:203–208.-公共医学
    1. Benhamou Y、Bochet M、Di Martino V、Charlotte F、Azria F、Coutellier A等。人类免疫缺陷病毒和丙型肝炎病毒复合感染患者的肝纤维化进展。Multivirc集团。肝病学。1999;30:1054–1058.-公共医学
    1. Macias J、Berenguer J、Japon M、Giron J、Rivero A、Lopez-Cortes L等。人类免疫缺陷病毒/丙型肝炎病毒共同感染患者重复肝活检之间的快速纤维化进展。肝病学。2009;50:1056–1063.-公共医学