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.2010年8月10日；107(32):14188-93.
doi:10.1073/pnas.1005960107。 Epub 2010年7月27日。

ATM-p53通路抑制非整倍体诱导的肿瘤发生

李敏（音） 1, 小方, 达伦·J·贝克, 郭林杰, 薛高, 朱伯伟, 韩树华, Jan M van Deursen先生, 张普明（Pumin Zhang）
附属公司

ATM-p53通路抑制非整倍体诱导的肿瘤发生

李敏（音）等。 美国国家科学院程序. .

摘要

主轴装配检查点（SAC）对于正确的姐妹染色单体分离至关重要。这个检查点的缺陷会导致染色体错位和非整倍体。越来越多的证据表明非整倍体在肿瘤发生中起着因果作用。然而，易发生非整倍体的突变小鼠只有轻微的肿瘤表型，这表明在非整倍性诱导的肿瘤发生中存在限制因素。这里我们提供证据证明p53是一个限制因素。在两个独立的非整倍体模型中，我们发现非整倍性激活了p53，p53的缺失大大加速了肿瘤的发展。p53激活依赖于共济失调-扩张症突变（ATM）基因产物和活性氧水平的增加。因此，ATM-p53通路不仅保护DNA损伤，还保护非整倍体。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
p53在SAC缺陷细胞中被激活。(A类)野生型和Cdc20突变型MEFs的蛋白质印迹分析。(B类)Ser18-磷酸化p53的免疫荧光染色。箭头表示染色较弱的细胞。(C类)量化的结果B类. (D类)野生型和Bub1突变MEF的Western blot分析。(E类)磷酸化Ser18 p53免疫染色的Bub1突变MEFs的定量。(F类)缺乏BUBR1、CENP E或MAD2的HCT116细胞的有丝分裂指数分析。*表示对照细胞和敲除细胞之间的统计显著性。(G公司)细胞的蛋白质印迹分析D类.
图2。
图2。
p53的激活与非整倍体相关。(A类)野生型和Cdc20的Western blot分析+/美国汽车协会用抗Cdc20的shRNA处理MEF美国汽车协会. (B类)细胞有丝分裂指数分析A类. (C类)MAD2缺失HCT116细胞的有丝分裂指数分析。(D类)MAD2缺失HCT116细胞的Western blot分析。(E类)siRNA转染后5天MAD2缺失HCT116细胞的核型分析。(F类)利用着丝粒探针对FACS分选的MAD2缺失HCT116细胞的第4和第10染色体（CEP4和CEP10）进行FISH核型分析。对100个细胞核进行了评分。*统计显著性(P（P）< 0.05).
图3。
图3。
p53缺失增强SAC缺乏小鼠的肿瘤发生。(A类)DNA损伤诱导的p53反应的Western blot分析。纳入未受辐射和受辐射（15Gy）野生型小鼠（前两条通道）的肠道，以显示正常的p53反应。从辐照Cdc20中分离出的肠道（I）和肿瘤（T）+/美国汽车协会对小鼠进行分析。(B类)脾细胞的核型分析。(C类)Cdc20突变小鼠的无瘤生存分析（Kaplan–Meier方法）。(D类)一例Cdc20胸腺肿瘤的光谱核型分析+/啊啊第53页−/−鼠标。(E类)Bub1突变小鼠的无瘤生存分析（Kaplan–Meier方法）。
图4。
图4。
ATM是SAC缺陷细胞中p53激活所必需的。(A类)野生型和Cdc20突变MEF中磷酸化Atm的Western blot分析。(B类)Bub1突变MEF中磷酸化Atm的Western blot分析。有关加载控制，请参见图1D类. (C类)HCT116细胞磷酸化ATM的Western blot分析。有关加载控制，请参见图1F类. (D类)野生型和Cdc20突变型MEF缺乏Atm的Western blot分析。(E类)菌落形成测定。(F类)无瘤生存分析（Kaplan–Meier方法）。
图5。
图5。
突变MEF中活性氧水平增加。(A类)MEF中葡萄糖消耗量的测量*P（P）< 0.05. (B类)MEF中的乳酸产量*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01. (C类)荧光染料CM-H2DCFDA显示ROS。(D类)细胞的FACS分析C类.
图6。
图6。
ROS负责SAC缺陷细胞中ATM和p53的激活。(A类)ROS和磷酸化p53的可视化。首先用CM-H2DCFDA培养细胞，然后进行Ser18-磷酸化p53的免疫染色。箭头指向ROS信号弱、p53染色弱的细胞。(B类)NAC处理MEF的生长曲线分析*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01. (C类)MEF处理后的Western blot分析N个-乙酰半胱氨酸（NAC）。(D类)转染MAD2 siRNA并经NAC处理的HCT116细胞的Western blot分析。(E类)野生型和Cdc20突变型MEF基因组DNA中8-OHdG水平的分析**P（P）< 0.01. (F类)与中的分析相同E类在Bub1缺陷MEF中完成。
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参考文献

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