跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
比较研究
.2010年11月；139(5):1740-52.
doi:10.1053/j.gastro.2010.07.041。 Epub 2010年7月23日。

自噬降低小鼠乙醇诱导的急性肝毒性和脂肪变性

丁文兴 1, 李敏（音）, 陈晓云, 红敏妮, 林志文, 高文涛, 陆滨丰, 唐娜·B·斯托兹, Dahn L Clemens公司, 尹晓明
附属公司
比较研究

自噬降低小鼠乙醇诱导的急性肝毒性和脂肪变性

丁文兴等。 胃肠病学. 2010年11月.

摘要

背景和目标：酗酒是肝损伤的主要原因。酒精性肝病的病理特征是长期发展的，但对酒精有害作用的细胞防御机制尚不清楚。我们研究了大自噬（一种进化上保守的细胞机制，通常在应激反应中激活）是否可以保护肝细胞免受乙醇毒性。

方法：小鼠急性灌胃给予乙醇。还研究了乙醇对原代肝细胞和肝细胞系的影响。

结果：乙醇诱导的小鼠肝脏和培养细胞中的大自噬需要乙醇代谢、活性氧的生成和雷帕霉素信号的哺乳动物靶点的抑制。药物或小干扰RNA抑制大自噬显著增加肝细胞凋亡和肝损伤；因此，大自噬可以保护细胞免受乙醇的毒性作用。乙醇诱导的大自噬似乎对受损的线粒体和积累的脂滴具有选择性，但对长寿命蛋白质没有选择性，这可能是其保护作用的原因。大量自噬的增加在药理学上降低了与急性乙醇暴露相关的肝毒性和脂肪变性。

结论：大自噬可保护小鼠肝脏免受乙醇诱导的毒性。修饰大分子自噬的试剂可能被开发成为酒精性肝病患者的治疗药物。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。急性乙醇暴露诱导肝脏自噬
（A–C）。按照指示处理GFP-LC3转基因小鼠（n=3-5），并通过共焦显微镜（A）分析肝脏切片。对每只动物的GFP-LC3点数量（平均值+扫描电镜）进行量化（B）。用免疫印迹法（C）分析肝脏总溶解物（TL）和重膜分数（HM）。(D类)按指示处理野生型小鼠（n=3），并用免疫印迹法分析肝脏部分。对每个样品进行LC3-II和p62的密度分析（平均值+SEM）。(E类). 对野生型肝脏样本进行EM处理。箭头表示自噬体。N： 细胞核，LD：脂滴。(F类). 测定每个给定区域的自噬体数量（平均值+扫描电镜）（n=3-4）。比例尺：20微米（A），2微米（E）。*：p<0.05。
图1
图1。急性乙醇暴露诱导肝脏自噬
（A–C）。按照指示处理GFP-LC3转基因小鼠（n=3-5），并通过共焦显微镜（A）分析肝脏切片。对每只动物的GFP-LC3点数量（平均值+扫描电镜）进行量化（B）。用免疫印迹法（C）分析肝脏总溶解物（TL）和重膜分数（HM）。(D类)按指示处理野生型小鼠（n=3），并用免疫印迹法分析肝脏部分。对每个样品进行LC3-II和p62的密度分析（平均值+SEM）。(E类). 对野生型肝脏样本进行EM处理。箭头表示自噬体。N： 细胞核，LD：脂滴。(F类). 测定每个给定区域的自噬体数量（平均值+扫描电镜）（n=3-4）。比例尺：20微米（A），2微米（E）。*：p<0.05。
图2
图2。乙醇体外诱导肝细胞自噬
(A–C). 将Ad-GFP-LC3感染的肝细胞按指示（A中80 mM乙醇）处理6小时，并通过共焦显微镜（A）或免疫印迹分析（C）进行检查。比例尺：20µm。每个实验（n=3）对GFP-LC3点（平均值+SEM）进行量化。(D–E型). Ad-GFP-LC3感染的肝细胞用乙醇（80 mM，D，40 mM，E–F）处理6小时，加入或不加入3-MA（D）或CQ（E，F）。每个实验（n=3）对GFP-LC3点（平均值+SEM）进行量化。对总裂解产物进行免疫印迹分析，并对LC3-II进行密度分析（平均值+扫描电镜）（n=3）。(F类). 肝细胞在William的培养基/10%血清中或在无乙醇或有乙醇的EBSS中培养15小时，并测定长期蛋白质降解（平均值+SEM，n=2-3）。*：p<0.001。
图2
图2。乙醇体外诱导肝细胞自噬
(A–C). 将Ad-GFP-LC3感染的肝细胞按指示（A中80 mM乙醇）处理6小时，并通过共焦显微镜（A）或免疫印迹分析（C）进行检查。比例尺：20µm。每个实验（n=3）对GFP-LC3点（平均值+SEM）进行量化。(D–E型). 用乙醇（80 mM，D，40 mM，E–F）处理Ad-GFP-LC3感染的肝细胞，加或不加3-MA（D）或CQ（E，F）处理6小时。每个实验（n=3）对GFP-LC3点（平均值+SEM）进行量化。对总裂解产物进行免疫印迹分析，并对LC3-II进行密度分析（平均值+扫描电镜）（n=3）。(F类). 肝细胞在William的培养基/10%血清中或在无乙醇或有乙醇的EBSS中培养15小时，并测定长期蛋白质降解（平均值+SEM，n=2-3）。*：p<0.001。
图3
图3。乙醇诱导的自噬需要乙醇代谢、ROS和mTOR抑制
(A类). 用含或不含4-MP、MnTBAP或NAC的乙醇（80 mM）处理Ad-GFP-LC3感染的肝细胞6小时。GFP-LC3点（平均值+SEM）从每个实验中进行量化（n=3）。(B–D类). Ad-GFP-LC3感染的HepG2（B，D）和VL-17A（B，C，D）细胞用乙醇（40 mM，除非另有说明）和其他试剂处理24小时。每个细胞的GFP-LC3点（平均值+SEM）从每个实验（B，C，n=3）和进行的免疫印迹分析（D）中进行量化。(E–F). 按指示处理原代肝细胞6小时，并对总裂解物进行免疫印迹分析。比例尺：10µm（A–B）。*：p<0.05。
图3
图3。乙醇诱导的自噬需要乙醇代谢、ROS和mTOR抑制
(A类). 用含或不含4-MP、MnTBAP或NAC的乙醇（80 mM）处理Ad-GFP-LC3感染的肝细胞6小时。GFP-LC3点（平均值+SEM）从每个实验中进行量化（n=3）。(B–D类). Ad-GFP-LC3感染的HepG2（B，D）和VL-17A（B，C，D）细胞用乙醇（40 mM，除非另有说明）和其他试剂处理24小时。每个细胞的GFP-LC3点（平均值+SEM）从每个实验（B，C，n=3）和进行的免疫印迹分析（D）中进行量化。(E–F). 按指示处理原代肝细胞6小时，并对总裂解物进行免疫印迹分析。比例尺：10µm（A–B）。*：p<0.05。
图3
图3。乙醇诱导的自噬需要乙醇代谢、ROS和mTOR抑制
(A类). 用含或不含4-MP、MnTBAP或NAC的乙醇（80 mM）处理Ad-GFP-LC3感染的肝细胞6小时。GFP-LC3点（平均值+SEM）从每个实验中进行量化（n=3）。(B–D类). Ad-GFP-LC3感染的HepG2（B，D）和VL-17A（B，C，D）细胞用乙醇（40 mM，除非另有说明）和其他试剂处理24小时。每个细胞的GFP-LC3点（平均值+SEM）从每个实验（B，C，n=3）和进行的免疫印迹分析（D）中进行量化。(E–F). 按指示处理原代肝细胞6小时，并对总裂解物进行免疫印迹分析。比例尺：10µm（A–B）。*：p<0.05。
图4
图4。抑制自噬促进乙醇处理的原代肝细胞和VL-17细胞凋亡
(A–B). 原代肝细胞按指示处理（A中80 mM乙醇）并用Hoechst 33342染色。每个实验（n=2）对细胞核破碎或浓缩的细胞（A中的箭头）（平均值+扫描电镜）进行量化。比例尺：10µm。(C类). 按照指示对VL-17A细胞进行24小时的处理。细胞凋亡（平均值+扫描电镜）如（A）所示（n=2）。(D–F型). 将VL-17A细胞按指示（80mM的乙醇）处理24小时。用免疫印迹法（D）分析Beclin 1的表达。测定细胞凋亡水平（E）和caspase活性（F）（平均值+SEM，n=2）。*：p<0.05。
图4
图4。抑制自噬促进乙醇处理的原代肝细胞和VL-17细胞凋亡
(A–B). 原代肝细胞按指示处理（A中80 mM乙醇）并用Hoechst 33342染色。每个实验（n=2）对细胞核破碎或浓缩的细胞（A中的箭头）（平均值+扫描电镜）进行量化。比例尺：10µm。(C类). 按照指示处理VL-17A细胞24小时。细胞凋亡（平均值+扫描电镜）如（A）所示（n=2）。(D–F型). 按照指示处理VL-17A细胞（80 mM乙醇）24小时。用免疫印迹法（D）分析Beclin 1的表达。测定细胞凋亡水平（E）和caspase活性（F）（平均值+SEM，n=2）。*：p<0.05。
图5
图5。抑制自噬增强乙醇诱导的肝损伤
(A–B). 按照指示处理野生型小鼠（n=4-6），并分析血液ALT水平（A）和肝脏caspase-3活性（B）（平均值+SEM）。(C–F类). 野生型小鼠被给予对照组或Atg7特异性siRNA 48小时，然后用乙醇再治疗16小时。对肝脏进行免疫印迹测定（C）、EM（D）和胱天蛋白酶-3活性测定（F），同时分析血液中的ALT水平（E）。数据（平均值+扫描电镜）由每只小鼠（n=3）测定。在C中，每条车道代表一个样本，星号表示非特定带。*：p<0.05。
图5
图5。抑制自噬增强乙醇诱导的肝损伤
(A–B). 按照指示处理野生型小鼠（n=4-6），并分析血液ALT水平（A）和肝脏caspase-3活性（B）（平均值+SEM）。(C–F类). 野生型小鼠被给予对照组或Atg7特异性siRNA 48小时，然后用乙醇再治疗16小时。对肝脏进行免疫印迹分析（C）、EM（D）和caspase-3活性分析（F），同时分析血液中的ALT水平（E）。数据（平均值+扫描电镜）由每只小鼠（n=3）测定。在C中，每条车道代表一个样本，星号表示非特定带。*：p<0.05。
图6
图6。乙醇诱导有丝分裂
(A类). 按照指示对野生型小鼠（n=3-4）进行处理。显示了含有线粒体的自噬体的典型肝脏EM图像，并对数据（平均值+SEM）进行了量化。(B类). 原代肝细胞用载体对照（a）或乙醇（b）处理6小时，并通过EM检查。图c从图b中的方框区域放大。箭头表示含有碎片线粒体的自噬体。M：线粒体；N： 原子核。(C–F类). 按照指示处理Ad-GFP-LC3感染的原代肝细胞6小时并成像（C）。面板C-g和C-k分别从面板C-f和C-j的装箱区域扩大。箭头表示包含线粒体的选定GFP-LC3环结构，这些结构被量化（平均值+SEM）（来自每个实验（n=3）D–F）。比例尺：0.5微米（A）、1微米（B）、20微米（C）。*：p<0.05。除非另有说明，否则乙醇的用量为80 mM。
图6
图6。乙醇诱导有丝分裂
(A类). 野生型小鼠（n=3-4）按指示进行治疗。显示了含有线粒体的自噬体的典型肝脏EM图像，并对数据（平均值+SEM）进行了量化。(B类). 用载体对照（a）或乙醇（b）处理原代肝细胞6小时，并用EM进行检查。c组从b组的方框区域扩大。箭头表示含有碎片线粒体的自噬体。M：线粒体；N： 原子核。(C–F类). 按照指示处理Ad-GFP-LC3感染的原代肝细胞6小时并成像（C）。面板C-g和C-k分别从面板C-f和C-j的装箱区域扩大。箭头表示包含线粒体的选定GFP-LC3环结构，这些结构被量化（平均值+SEM）（来自每个实验（n=3）D–F）。比例尺：0.5微米（A）、1微米（B）、20微米（C）。*：p<0.05。除非另有说明，否则乙醇的用量为80 mM。
图6
图6。乙醇诱导有丝分裂
(A类). 野生型小鼠（n=3-4）按指示进行治疗。显示了含有线粒体的自噬体的典型肝脏EM图像，并对数据（平均值+SEM）进行了量化。(B类). 用载体对照（a）或乙醇（b）处理原代肝细胞6小时，并用EM进行检查。c组从b组的方框区域扩大。箭头表示含有碎片线粒体的自噬体。M：线粒体；N： 原子核。(C–F类). 按照指示处理Ad-GFP-LC3感染的原代肝细胞6小时并成像（C）。面板C-g和C-k分别从面板C-f和C-j的装箱区域扩大。箭头表示包含线粒体的选定GFP-LC3环结构，这些结构被量化（平均值+SEM）（来自每个实验（n=3）D–F）。比例尺：0.5微米（A）、1微米（B）、20微米（C）。*：p<0.05。除非另有说明，否则乙醇的用量为80 mM。
图7
图7。调节自噬影响乙醇诱导的肝脂肪变性
(A类). GFP-LC3转基因小鼠按指示治疗16小时。用Bodipy 581/591-C11对肝脏的Cyrosection进行染色。(B类). 放大的图像表示GFP-LC3和Body581/591-C11信号（箭头）的三种关系，如图所示。(C–D类). GFP-LC3转基因小鼠（n=3-5）按指示治疗16小时。肝脏冰冻切片用Bodypy 581/591-C11（C）染色。对每个细胞的GFP-LC3点（a）、每个细胞的体阳性脂滴（b）和肝甘油三酯水平（c）（平均值+扫描电镜）进行量化（D）。(E类). 野生型小鼠（n=3）按指示进行治疗。用电镜检查肝脏样品，并量化每个细胞的LD数（平均值+扫描电镜）。(F类). 野生型小鼠（n=3）用对照或Atg7-特异性siRNA治疗48小时，然后用乙醇治疗16小时。通过体染色（a）或EM（b）测定肝脏中每个细胞的LD数和肝甘油三酯水平（c）（平均值+SEM）。比例尺：20微米（A–C），2微米（E）。*：p<0.05
图7
图7。调节自噬影响乙醇诱导的肝脂肪变性
(A类). GFP-LC3转基因小鼠按指示治疗16小时。肝细胞切片用Bodypy 581/591-C11染色。(B类). 放大的图像表示GFP-LC3和Body581/591-C11信号（箭头）的三种关系，如图所示。(C–D类). GFP-LC3转基因小鼠（n=3-5）按指示治疗16小时。肝脏冰冻切片用Bodypy 581/591-C11（C）染色。对每个细胞的GFP-LC3点（a）、每个细胞的体阳性脂滴（b）和肝甘油三酯水平（c）（平均值+扫描电镜）进行量化（D）。(E类). 野生型小鼠（n=3）按照指示进行处理。用电镜检查肝脏样品，并量化每个细胞的LD数（平均值+扫描电镜）。(F类). 野生型小鼠（n=3）用对照或Atg7-特异性siRNA治疗48小时，然后用乙醇治疗16小时。通过体染色（a）或EM（b）测定肝脏中每个细胞的LD数和肝甘油三酯水平（c）（平均值+SEM）。比例尺：20微米（A–C），2微米（E）。*：p<0.05
图7
图7。调节自噬影响乙醇诱导的肝脂肪变性
(A类). GFP-LC3转基因小鼠按指示治疗16小时。肝细胞切片用Bodypy 581/591-C11染色。(B类). 放大的图像表示GFP-LC3和Body581/591-C11信号（箭头）的三种关系，如图所示。(C–D类). GFP-LC3转基因小鼠（n=3-5）按指示治疗16小时。肝脏冰冻切片用Bodypy 581/591-C11（C）染色。对每个细胞的GFP-LC3点（a）、每个细胞的体阳性脂滴（b）和肝甘油三酯水平（c）（平均值+扫描电镜）进行量化（D）。(E类). 野生型小鼠（n=3）按指示进行治疗。通过EM检查肝脏样品，并定量每个细胞的LD数量（平均值+SEM）。(F类). 野生型小鼠（n=3）用对照或Atg7-特异性siRNA治疗48小时，然后用乙醇治疗16小时。通过Bodipy染色（a）或EM（b）测定肝脏中每个细胞的LD数量和肝脏甘油三酯水平（c）（平均值+SEM）。比例尺：20微米（A–C），2微米（E）。*：p<0.05
图7
图7。调节自噬影响乙醇诱导的肝脂肪变性
(A类). GFP-LC3转基因小鼠按指示治疗16小时。肝细胞切片用Bodypy 581/591-C11染色。(B类). 放大的图像表示GFP-LC3和Body581/591-C11信号（箭头）的三种关系，如图所示。(C–D类). GFP-LC3转基因小鼠（n=3-5）按指示治疗16小时。肝脏冰冻切片用Bodypy 581/591-C11（C）染色。对每个细胞的GFP-LC3点（a）、每个细胞的体阳性脂滴（b）和肝甘油三酯水平（c）（平均值+扫描电镜）进行量化（D）。(E类). 野生型小鼠（n=3）按指示进行治疗。用电镜检查肝脏样品，并量化每个细胞的LD数（平均值+扫描电镜）。(F类). 野生型小鼠（n=3）用对照或Atg7-特异性siRNA治疗48小时，然后用乙醇治疗16小时。通过体染色（a）或EM（b）测定肝脏中每个细胞的LD数和肝甘油三酯水平（c）（平均值+SEM）。比例尺：20微米（A–C），2微米（E）。*：p<0.05
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

  • 肝细胞程序性细胞死亡：代谢功能障碍相关脂肪性肝炎炎症和纤维化的触发因素。
    Cheng Z、Chu H、Seki E、Lin R、Yang L。 Cheng Z等人。 前细胞发育生物学。2024年7月12日；12:1431921. doi:10.3389/fcell.2024.1431921。eCollection 2024年。 前细胞发育生物学。2024 PMID：39071804 免费PMC文章。 审查。
  • 胰腺炎自噬的最新研究进展。
    丁WX、马X、金S、王S、倪HM。 丁文新等。 电子胃肠病学。2024年4月；2（2）：e100057。doi:10.1136/egastro-2023-100057。Epub 2024年5月3日。 电子胃肠病学。2024 PMID：38770349 免费PMC文章。
  • 自噬在其（适当）背景下：分子基础、生物学相关性、药理学调节和生活方式医学。
    马萨诸塞州奥尔特加市、弗莱尔·马丁内斯市、德莱昂·奥利瓦市D区、博阿鲁市DL区、洛佩兹·冈萨雷斯市L区、加西亚·蒙特罗市C区、阿尔瓦雷兹·蒙顿市MA区、吉亚罗市LG区、托雷斯·卡兰萨D区、塞兹市MA区，迪亚兹·佩德雷罗R区、阿尔比洛斯a区、阿尔瓦雷兹·蒙市M区。 Ortega MA等人。 国际生物科学杂志。2024年4月22日；20(7):2532-2554. doi:10.7150/ijbs.95122。eCollection 2024年。 国际生物科学杂志。2024 PMID：38725847 免费PMC文章。 审查。
  • 肝脏疾病和肝脏手术中的细胞死亡。
    Stoess C、Choi YK、Onyuru J、Friess H、Hoffman HM、Hartmann D、Feldstein AE。 Stoess C等人。 生物医学。2024年3月1日；12(3):559. doi:10.3390/生物医学12030559。 生物医学。2024 PMID：38540172 免费PMC文章。 审查。
  • FGF21介导的自噬：在肝脏疾病的应激反应中重塑体内平衡。
    Shen W，Yang M，Chen H，He C，Li H，Yang X，Zhuo J，Lin Z，Hu Z，Lu D，Xu X。 沈伟等。 基因疾病。2023年7月13日；11(3):101027. doi:10.1016/j.gendis.2023.05.019。eCollection 2024年5月。 基因疾病。2023 PMID：38292187 免费PMC文章。 审查。
查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Zakhari S，Li TK。酒精使用和滥用的决定因素：数量和频率模式对肝脏疾病的影响。肝病学。2007;46:2032–2039.-公共医学
    1. Lumeng L，Crabb DW公司。酒精性肝病。胃肠病学当前操作。2000;16:208–218.-公共医学
    1. Bailey SM，Cunningham CC。线粒体对酒精性肝病相关氧化应激的贡献。自由基生物医药2002；32:11–16.-公共医学
    1. Carmiel-Haggai M、Cederbaum AI、Nieto N.丙种酒精暴露会增加肥胖大鼠的肝损伤。胃肠病学。2003;125:1818–1833.-公共医学
    1. Lieber CS公司。酒精性脂肪肝：其发病机制和进展为炎症和纤维化的机制。酒精。2004;34:9–19.-公共医学

出版物类型