跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年9月24日；285(39):30019-25.
doi:10.1074/jbc。M110.143511。 Epub 2010年7月16日。

α-甘露糖苷酶通过自噬途径的选择性转运：一种新受体Atg34p的鉴定

铃木库尼诺里 1, Chika Kondo公司, 森本真美, Ohsumi吉诺里
附属公司

α-甘露糖苷酶通过自噬途径的选择性转运：一种新受体Atg34p的鉴定

铃木库尼诺里等。 生物化学杂志. .

摘要

在酿酒酵母中，氨肽酶I（Ape1p）和α-甘露糖苷酶（Ams1p）是已知的选择性自噬产物。Atg19p已被确定为Ape1p受体，并将Ape1p靶向前吞噬体结构（PAS）。在营养丰富的条件下，Ams1p向液泡的转运在很大程度上依赖于Atg19p。在这里，我们表明Atg34p（Yol083wp）是Atg19p的同源物，是自噬过程中Ams1p转运的受体。Atg34p使用不同的域与Ams1p、Atg11p和Atg8p进行交互。与Atg34p的Ams1-binding结构域结合的同源低聚化Ams1p；这种结合对于形成一种称为Ams1复合物的高阶复合物很重要。在缺乏Atg34p与Atg8p相互作用的情况下，Ams1复合体被靶向了前自噬体结构，但未能转移到液泡，这表明Atg34p/Atg8p的相互作用对于Ams1复合物被自噬小体包裹至关重要。Atg34p和Atg19p具有相似的结构域结构，并且在自噬过程中对Ams1p的转运很重要。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
Yol083wp参与Ams1p向液泡的转运。 A类，染色体表达Ams1p-GFP的细胞在SD+酪氨酸培养基中培养，密度约为A类600=1.5，添加雷帕霉素诱导自噬。培养6小时后，通过荧光显微镜观察细胞。箭头和箭头分别表示Ams1p点结构（Ams1复合物）和液泡。所有菌株都具有相同的遗传背景（GYS337）。这个比例尺表示5μm。B类，中使用的单元格A类用雷帕霉素处理3h，用碱裂解法制备细胞裂解物。相当于0.1A类600用抗GFP抗血清进行免疫印迹。
图2。
图2。
Atg34p与Ams1p、Atg8p和Atg11p相互作用。 A类，Atg34p使用不同的域与Ams1p、Atg8p、Attg11p及其自身进行交互。用pGBD-ATG34、pGBD-AMS1、pGBD-ATG11、pGBD-ATG14ΔC4、pGAD-ATG14ΔC33、pGAD-ATG34ΔC255、pGAD或空载体转化PJ69-4A细胞或空载体。细胞在SC（−LW）培养基中培养过夜。5微升0.1-A类600在SC（−LW）或SC（−ALW）板上发现单位等分细胞。这些平板在30°C下培养3-4天。B类，Atg34p中绑定域的示意图。Atg34p与至少四种蛋白质相互作用。蓝色,橙色,绿色、和红色区域分别表示Atg34p、Ams1p、Atg11p和Atg8p相互作用所需的结构域。C类，Atg34p不与prApe1p相互作用，而Atg19p则相互作用。PJ69-4A细胞含有pGAD-ATG19和pGBD-APE1或pGAD-ATM34和pGBD-APE1，按照A类.
图3。
图3。
Atg34p与Ams1p的结合对于Ams1复合物的形成至关重要。 A类，Atg34（158–379）足以与Ams1p交互。如图2所示，对含有所示质粒的细胞进行分析答：BAms1p-GFP细胞缺乏这两者ATG19型和第34页（GYS360）和表达来自pRS316质粒的Atg34p突变体。将含有所示质粒的细胞培养在SD+酪氨酸培养基中，密度约为A类600=1.5，添加雷帕霉素诱导自噬。培养6小时后，通过荧光显微镜观察细胞。箭头和箭头分别表示Ams1复合物和液泡。这个比例尺表示5μm。C类，中使用的单元格B类在添加雷帕霉素后的指定时间收集，并通过碱解方法制备裂解产物。细胞裂解物相当于0.1A类600用抗GFP抗血清和抗Atg34p抗体进行免疫印迹。通过Ams1p-GFP在液泡中的蛋白水解，产生游离GFP来监测Ams1p-GFP的转运。安星号表示非特异性带。
图4。
图4。
通过AIM与Atg8p的相互作用对于Atg34p将Ams1复合物靶向自噬体很重要。 A类，总计34AEEA公司p不与Atg8p交互。如图2所示，通过酵母双杂交试验监测相互作用答：B，Atg34ΔC4p和Atg34埃埃亚p在Ams1p传输中有缺陷。第19天Δ第34页Δ细胞表达Ams1p-GFP（GYS360）并携带空载体（−）或表达野生型Atg34p(重量)，额定值34ΔC4p（Δ补体第四成份)，或Atg34AEEA公司第页(埃埃亚)在SD+酪氨酸培养基中培养，并添加雷帕霉素诱导自噬。孵育6 h后，收集细胞，并通过碱性裂解方法制备细胞裂解物。细胞裂解物相当于0.1A类600用抗GFP和抗Atg34p抗体进行免疫印迹。C类Ams1p-GFP在缺乏与Atg8p相互作用的Atg34p突变体中的定位。中使用的单元格B类荧光显微镜观察。为了比较荧光强度，Ams1p-GFP图像使用相同的亮度和对比度显示。这个比例尺表示5μm。
图5。
图5。
与Atg8p相互作用缺陷的Atg34p突变体不包含在自噬体中。表达每个GFP融合蛋白的细胞在SD+酪氨酸培养基中培养，密度约为A类600=1.5，在荧光显微镜前用雷帕霉素处理6小时。Atg34p-GFP（GYS390），Atg34ΔC4p-GFPAEEA公司p-GFP（GYS822），附件34p-GFP第11天Δ第17页Δ（GYS812）和Atg34ΔC4p-GFP第11天Δ第17天采用Δ（GYS820）菌株。为了比较荧光强度，使用相同的亮度和对比度显示Atg34p-GFP图像。这个比例尺代表5μm。
图6。
图6。
Atg34pΔC4p-GFP针对PAS。将携带2×mCherry ATG8质粒的细胞培养并用雷帕霉素处理6小时。将Atg34p-GFP定位于PAS并连续递送至液泡。Atg34ΔC4p是针对PAS的，但未能转移到液泡。注意，2×mCherry-Atg8p标记空泡腔，表明Atg34ΔC4p-GFP菌株中的自噬是正常的。这个比例尺表示5μm。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

  • 受体介导的大宗自噬货物搭便车。
    武田E、Isoda T、细川S、小川Y、Hotta-Ren S、May AI、Ohsumi Y。 武田E等人。 EMBO J.2024年5月16日。doi:10.1038/s44318-024-00091-8。打印前在线。 EMBO J.2024。 PMID：38755257
  • Atg8家族蛋白、LIR/AIM基序和其他相互作用模式。
    Rogov VV、Nezis IP、Tsapras P、Zhang H、Dagdas Y、Noda NN、Nakatogawa H、Wirth M、Mouilleron S、McEwan DG、Behrends C、Deretic V、Elazar Z、Tooze SA、Dikic I、Lamark T、Johansen T。 Rogov VV等人。 Autophagy Rep.2023年3月19日；2(1):27694127.2023.2188523. doi:10.1080/27694127.2023.2188523。eCollection 2023年12月31日。 Autophagy Rep.2023年。 PMID：38214012 免费PMC文章。
  • Ksp1是Ssn2/Med13的Snx4辅助自噬的自噬受体蛋白。
    Hanley SE、Willis SD、Doyle SJ、Strich R、Cooper KF。 Hanley SE等人。 自噬。2024年2月；20(2):397-415. doi:10.1080/15548627.2023.2259708。Epub 2024年1月25日。 自噬。2024 PMID：37733395 免费PMC文章。
  • 与神经退行性疾病相关的包涵体通过芽殖酵母中的选择性自噬清除。
    Folger A、Chen C、Kabbaj MH、Frey K、Wang Y。 Folger A等人。 《自噬报告》2023；2(1):2236407. doi:10.1080/27694127.2023.2236407。Epub 2023年8月7日。 自噬众议员2023。 PMID：37680383
  • NBR1：原型选择性自噬受体。
    Rasmussen NL、Kournoutis A、Lamark T、Johansen T。 Rasmussen NL等人。 细胞生物学杂志。2022年11月7日；221（11）：e202208092。doi:10.1083/jcb.202208092。Epub 2022年10月18日。 细胞生物学杂志。2022 PMID：36255390 免费PMC文章。 审查。
查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 铃木K.，Ohsumi Y.（2010）FEBS Lett。584、1280–1286-公共医学
    1. 铃木K.，Kirisako T.，Kamada Y.，水岛N.，野田T.，Ohsumi Y.（2001）EMBO J.20，5971–5981-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Baba M.、Osumi M.、Scott S.V.、Klonsky D.J.、Ohsumi Y.（1997）《细胞生物学杂志》。139, 1687–1695-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Hutchins M.U.、Klinsky D.J.（2001）《生物学报》。化学。276, 20491–20498-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Shintani T.，Huang W.P.，Stromhaug P.E.，Klonsky D.J.（2002）Dev.Cell 3，825–837-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语