跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年7月1日；21(13):2270-84.
doi:10.1091/mbc.e09-04-0345。 Epub 2010年5月5日。

酿酒酵母中自噬体吞噬体的扩张需要离开高尔基体

阿尼克·范德法特 1, 贾妮斯·格里菲斯, 富尔维奥·雷吉奥里
附属公司

酿酒酵母中自噬吞噬体的扩张需要高尔基体的退出

阿尼克·范德法特等。 摩尔生物细胞. .

摘要

蛋白质和细胞器通过自噬传递到液泡涉及膜重排，导致形成称为自噬体的大囊泡。自噬体生物发生的机制以及构成这些小泡的膜的起源仍不清楚。我们研究了高尔基复合体在自噬中的作用，并确定在酵母中，Sec7、Gea1和Gea2激活ADP-核糖基化因子（Arf）1和Arf2-GTPases对这一分解代谢过程至关重要。由这些成分催化的两个主要事件，即COPI包衣囊泡的生物生成和氯氰菊酯包衣囊囊泡，在自噬中并不起关键作用。在饥饿条件下对sec7菌株的分析表明，自噬机制组装正确，自噬体的前体膜池（吞噬细胞）正常形成。然而，吞噬细胞向自噬体的扩张受到严重损害。我们的数据表明，高尔基复合体在提供双膜囊泡生物生成所需的脂质双层方面发挥着关键作用，可能通过一类新的转运载体或新的机制。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
GFP-Atg8的处理在第7秒突变体。重量（6210瑞典克朗），atg1处ts秒（用表达Atg1的质粒转化的WHY1ts秒)，以及第7秒ts秒携带pCuGFPAtg8416质粒的（AFM69-1A）细胞在24°C下生长至早期对数期。然后通过添加雷帕霉素诱导自噬，将细胞置于24或37°C。在4小时内每隔1小时收集培养等分样品，并通过细胞提取物的Western blot分析测定GFP-Atg8的裂解。使用Odyssey软件量化条带，绘制GFP-Atg8（黑色）和GFP（灰色）的百分比。的数据第7秒ts秒突变图表示四个实验的平均值。
图2。
图2。
WT的电子显微镜分析，atg1处ts秒、和第7秒ts秒细胞处于营养丰富和饥饿状态。（A） 重量第四人民党Δ（TVY1），atg1处ts秒第四人民党Δ（表达Atg1的质粒转化的YTS113菌株ts秒)，以及第7秒ts秒第四人民党Δ（AVY004）细胞在24°C的富培养基中生长到早期对数期，然后在24或37°C的条件下转移到SD-N培养基中2h。同时，将细胞放置在37°C下2小时。在每次培养开始和结束时收集培养液等分，并按照中所述进行EM处理材料和方法.（B）量化累积的自噬体。结果表示为每个液泡中自噬体的平均数量。误差条表示两个不同网格计数中的SD。N、 细胞核；五、 液泡；*，自噬体。条形，500 nm。
图3。
图3。
Sec7、Gea1和Gea2的GEF活性激活高尔基Arf蛋白对自噬至关重要。这个能量6Δ,gea1号机组ts秒gea2号机组Δ（APY022），arf1ts秒arf2型Δ（146 SSY146），重试2ts秒（PC130），以及重试3ts秒携带pCuGFPAtg8416或pCuGFPAtg8414质粒的（FLY89）细胞按照图1所示进行生长和处理，但以下细胞除外能量6Δ，在30°C下进行分析。为了抑制第七节全球环境基金的所有活动，将BFA添加到能量6Δ突变。使用Odyssey系统对GFP-Atg8处理进行量化。图表示两个实验的平均值。当重复相同的实验时，获得了相同的结果，并且自噬是由SD-N培养基中的氮饥饿诱导的（数据未显示）。
图4。
图4。
自噬分析arf1ts秒arf2型Δ和重试3ts秒细胞。（A）arf1ts秒arf2型Δ第四人民党Δ（AVY007）和重试3ts秒第四人民党Δ（AVY037）细胞在24°C的富培养基中生长至早期对数期，并在37°C下转移2 h或在24或37°C的SD-N培养基中饥饿2 h后进行EM处理。（B） 累积自噬体的量化。结果表示为每个液泡中自噬体的平均数量。误差条表示两个不同网格计数中的SD。N、 细胞核；五、 液泡；*，自噬体。条形，500 nm。（C） Ret3对自噬不是必需的。这个重试3ts秒第8页Δ60磷13Δ（AVY042）细胞在24℃富液培养基中生长到早期对数期，然后转移到SD-N培养基中诱导自噬。然后在24或37°C下培养细胞，并在0、2和4 h后取培养液等分。按照材料和方法。误差条表示三个实验的SD。
图5。
图5。
第7节未本地化为PAS。（A） 重量（AVY006）和（B）第7秒ts秒表达内源性Sec7-dsRed并携带pCuGFPATG8416质粒的（AVY012）细胞在24°C下生长至早期对数期。然后加入雷帕霉素，将培养物转移到指定温度下1小时。或者，在37°C下，在不存在雷帕霉素的情况下，将细胞孵育1小时。最后通过荧光显微镜观察细胞。驾驶员信息中心（DIC），差分干扰对比度。
图6。
图6。
Atg2被正确招募到PAS中第7秒ts秒突变体。这个第7秒ts秒菌株（AFM69-1A）和WT菌株（SEY6210）通过pTS112载体（GFP-Atg2）在自动液位计2在添加雷帕霉素之前，在允许的温度下将真正的启动子培养到早期对数期，然后将细胞保持在24℃或转移到37℃1 h。使用荧光显微镜对细胞进行成像。驾驶员信息中心（DIC），差分干扰对比度。
图7。
图7。
Atg机械的装配在第7秒ts秒突变体。（A） 重量（FRY341）和（B）第7秒ts秒表达Sec7-dsRed和Atg9-GFP的（AVY046）细胞在其真实启动子的控制下在24°C下生长至早期对数期。然后添加雷帕霉素，并将培养物转移到指定温度下1小时。或者，在没有该药物的情况下，在37°C下培养细胞1小时。
图8。
图8。
Atg9贩运受到损害第7秒ts秒突变体。（A） 重量（162新加坡元），atg1处ts秒（FRY170与携带自动液位计1ts秒等位基因），第7秒ts秒（326新加坡元）和第7秒ts秒atg1处ts秒（AVY065与携带自动液位计1ts秒表达Atg9-GFP的等位基因）细胞在其真正启动子的控制下在24℃下生长至早期对数期，然后在37℃下转移1 h。在温度变化前后对细胞进行成像。（B） 在雷帕霉素存在下重复A中描述的实验，以研究自噬激活后Atg9的贩运。
图9。
图9。
Sec7对吞噬细胞的扩张至关重要。野生型（菌株AVY047；A）和第7秒ts秒表达RFP-Ape1并携带pCuGFPATG8416质粒的（菌株AVY048；B）菌株在24℃下生长至早期对数期。然后将雷帕霉素添加到培养物中，将培养物保存在24℃或转移到37℃1 h。最后通过荧光显微镜观察细胞。prApe1低聚物与第7秒ts秒在限制温度下突变。（C–F）第7秒ts秒（AFM69-1A）菌株在24°C下生长到早期对数阶段，然后在SD-N培养基中转移到37°C下1小时。对细胞进行IEM处理，如材料和方法以及通过用抗Ape1抗体和蛋白A–15 nm金颗粒缀合物标记冷冻切片来鉴定PAS。五、 液泡。条形，200 nm。驾驶员信息中心（DIC），差分干扰对比度。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

  • 自噬体形成：分泌和自噬途径相遇的地方。
    Wang J、Davis S、Zhu M、Miller EA、Ferro-Novick S。 王杰等。 自噬。2017年5月4日；13(5):973-974. doi:10.1080/15548627.2017.1287657。Epub 2017年2月15日。 自噬。2017 PMID：28287860 免费PMC文章。 审查。
  • 自噬体生物发生机制。
    Rubinsztein DC、Shpilka T、Elazar Z。 Rubinsztein DC等人。 当前生物。2012年1月10日；22（1）：R29-34。doi:10.1016/j.cub.2011.11.034。 当前生物。2012 PMID：22240478 审查。
  • 高尔基体作为自噬的潜在膜源。
    耿J，Klinsky DJ。 耿杰等。 自噬。2010年10月；6(7):950-1. doi:10.4161/auto.6.7.13009。Epub 2010年10月14日。 自噬。2010 PMID：20729630 免费PMC文章。
  • 高尔基复合体是酵母自噬体膜的来源。
    范德法特A，雷吉奥里F。 van der Vaart A等人。 自噬。2010年8月；6(6):800-1. doi:10.1091/mbc。E09-04-0345。 自噬。2010 PMID：20714226
  • 在酿酒酵母中，高尔基后Sec蛋白是自噬所必需的。
    Geng J、Nair U、Yasumura-Yorimitsu K、Klinsky DJ。 耿杰等人。 分子生物学细胞。2010年7月1日；21(13):2257-69. doi:10.1091/mbc.e09-11-0969。Epub 2010年5月5日。 分子生物学细胞。2010 PMID：20444978 免费PMC文章。
查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Anders N.、Jurgens G.膜贩运中的大型ARF鸟嘌呤核苷酸交换因子。细胞分子生命科学。2008;65:3433–3445.-公共医学
    1. Audhya A.、Foti M.、Emr S.D.酵母磷脂酰肌醇4-激酶Stt4p和Pik1p在分泌、细胞生长和细胞器膜动力学中的独特作用。分子生物学。单元格。2000;11:2673–2689.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Baba M.、Osumi M.、Scott S.V.、Klinsky D.J.、Ohsumi Y.从细胞质到液泡/溶酶体靶向蛋白质的两条不同途径。细胞生物学杂志。1997;139:1687–1695.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bethune J.、Wieland F.、Moelleken J.COPI介导的转运。J.成员。生物学2006；211:65–79.-公共医学
    1. Bugnicourt A.、Mari M.、Reggiori F.、Haguenauer-Tasapis R.、Galan J.M.Irs4p和Tax4p：参与自噬的两个冗余EH域蛋白。交通。2008;9:755–769。-公共医学

出版物类型

MeSH术语