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.2010年2月16日；5（2）：e9238。
doi:10.1371/journal.pone.0009238。

非滤过性脑膜瘤中波形蛋白磷酸化增加

阿里·布瓦姆拉尼 1, 克莱尔·拉穆斯, 艾曼纽尔·盖伊, 劳伦特·佩利蒂尔, Myriam Cubizolles公司, 萨宾·布鲁盖尔, 迪迪埃·维恩, 弗朗索瓦·伯杰, Jean-Paul Issartel公司
附属公司

非滤过性脑膜瘤中波形蛋白磷酸化增加

阿里·布阿姆拉尼等人。 公共科学图书馆一号. .

摘要

背景：组织浸润或组织浸润是预后较差的脑膜瘤亚型的临床表现。我们对组织提取物进行了蛋白质组学分析，以发现新的标记物来准确区分浸润性和非浸润性脑膜瘤。

方法/主要发现：对64个不同组织样本（包括两个脑无创性肿瘤和32个浸润性肿瘤）的蛋白裂解物进行SELDI-TOF质谱分析。肿块轮廓用于建立无监督和监督的分级聚类。在非侵袭性和非渗透性肿瘤中发现一个标记物在高水平上，似乎是区分浸润性和/或侵袭性脑膜瘤与非侵袭性脑膜癌在两个不同亚群中的聚类标记。敏感性和特异性分别为86.7%和100%。该标记物被纯化并鉴定为波形蛋白的一种多磷酸化形式，波形蛋白是脑膜瘤中表达的一种细胞骨架蛋白。

结论/意义：波形蛋白的特定形式可以作为肿瘤侵袭/浸润表型的替代分子指标。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：Myriam Cubizolles被销售SELDI-TOF设备的公司聘为工程师。这一事实并没有改变作者对所有PLoS ONE数据和材料共享政策的遵守。

数字

图1
图1。肿瘤的无监督分层聚类。
在使用Biomarker Wizard软件（Ciphergen）进行SELDI-TOF质谱处理后，对64个肿瘤（32个浸润性、2个侵袭性和30个非侵袭性肿瘤）进行二维分层聚类，得到69个分子质量峰。使用Eisen聚类软件中的完全连锁聚类方法对候选标记和患者样本进行聚类。聚类树使用Eisen的Treeview软件显示。红色方块表示与平均值相比标记物浓度较高；绿色方块表示与平均值相比的低浓度。指出了两组中浸润性或侵入性样本以及非浸润性或非侵入性样本的数量。
图2
图2。Q10阴离子交换蛋白质芯片阵列上的SELDI-TOF质谱蛋白质剖面分析。
分析了两个具有代表性的样本提取物，一个来自浸润性肿瘤（A和C），另一个来自非浸润性瘤（B和D）。（A和B）20至60kDa范围内的质谱轨迹。A和B光谱的（C和D）凝胶视图。图B中的箭头显示了非滤过性肿瘤提取物中的53-kDa标记物。
图3
图3。临床样本中53-kDa标记物的定量评估。
使用SELDI-TOF在Q10阴离子交换蛋白芯片阵列上分析肿瘤提取物，如图2所示。测量53-kDa质量水平的信号强度，并计算（A）浸润性/侵袭性肿瘤样本，（B）非浸润性肿瘤样本的参数。中位数，25第个和75第个百分位数用方框中的线段标记，用条形图标记最低和最高信号值。
图4
图4。53-kDa标记的纯化。
将非滤过组织的裂解液提交至材料和方法中报告的纯化方法。在变性条件下，在12%聚丙烯酰胺凝胶上进行质量控制，切割53-kDa带，并进一步进行分析以进行鉴定。车道1：质量梯；通道2和3：纯化53-kDa标记（分别为0.5µg和20µg）；通道4：脑膜瘤溶解物。
图5
图5。53-kDa标记被鉴定为波形蛋白。
经色谱和电泳纯化后，53-kDa标记被蛋白酶切割。（A） 通过NP20蛋白质芯片阵列上的SELDI-TOF分析获得GluC内蛋白酶消化后的肽指纹。测得的分子量与计算出的波形蛋白GluC内蛋白酶蛋白水解肽相匹配的肽用星号表示。（B） 由SELDI-TOF鉴定的波形蛋白的GluC内蛋白酶肽按其质量列出。（C） 将肽质量指纹图谱或纳米LC-MS/MS鉴定的肽映射到波形蛋白序列。以灰色突出显示的序列对应于B中确定的GluC内蛋白酶肽。下划线序列对应于纳米LC-MS/MS确定的60个胰蛋白酶肽。磷酸化肽（37-50个氨基酸和70-78个氨基酸肽）用圆点下划线。
图6
图6。53-kDa标记是波形蛋白的磷酸化形式。
用碱性磷酸酶处理从非滤过组织提取物中纯化的53-kDa标记物，并使用SELDI-TOF MS分析样品。在Q10阴离子交换蛋白芯片阵列（A和B）或亲水性NP20蛋白芯片阵列上进行分析（C和D）。（A和C）使用未经处理的纯化53-kDa标记物进行对照。（B和D）磷酸酶处理标记。
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