PDGF-A interactions with fibronectin reveal a critical role for heparan sulfate in directed cell migration during Xenopus gastrulation

doi:10.1073/pnas.0902510106

.2009年12月22日；106(51):21683-8.

doi:10.1073/pnas.0902510106。 Epub 2009年12月4日。

PDGF-A与纤维连接蛋白的相互作用揭示了硫酸乙酰肝素在非洲爪蟾原肠胚形成期间定向细胞迁移中的关键作用

艾琳·M·史密斯¹, 玛丽亚·米西, 马修·阿努金特, 凯伦·赛姆斯

附属公司

PMID： 19966216
预防性维修识别码：项目经理2799789
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.0902510106

PDGF-A与纤维连接蛋白的相互作用揭示了硫酸乙酰肝素在非洲爪蟾原肠胚形成期间定向细胞迁移中的关键作用

艾琳·M·史密斯等。美国国家科学院程序. 2009.

.2009年12月22日；106(51):21683-8.

doi:10.1073/pnas.0902510106。 Epub 2009年12月4日。

作者

艾琳·M·史密斯¹, 玛丽亚·米西, 马修·阿努金特, 凯伦·赛姆斯

隶属关系

¹波士顿大学医学院生物化学系，地址：72 East Concord Street，Boston，MA 02118，USA。

PMID： 19966216
预防性维修识别码： 799789下午
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.0902510106

摘要

血小板衍生生长因子（PDGF）信号对包括小鼠、青蛙、斑马鱼和海胆在内的多种生物体胚胎发育期间涉及细胞运动和分化的过程至关重要。在非洲爪蟾早期胚胎中，PDGF-AA为前肠系膜细胞在富含纤维连接蛋白的细胞外基质上移动时的迁移提供了指导线索。PDGF-a的长型包括带正电荷的羧基末端保留基序，该基序可与细胞外基质和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）相互作用在本研究中，我们证明PDGF-AA直接与纤维连接蛋白结合，肝素可大大增强这种联系。PDGF-AA-纤维连接到蛋白结合发生在广泛的pH值范围内（5.5-9），这一点非常重要，因为PDGF引导的爪蟾肠系膜细胞迁移发生在基本细胞外条件下（pH 8.4）。我们进一步证明，PDGF-AA引导的肠系膜运动需要内源性HSPG，这表明HSPG在体内调节PDGF-AA和纤维连接蛋白之间的相互作用。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

**图1。**
用肝素预处理纤维连接蛋白可增加PDGF-AA与纤维连连接蛋白的结合(A类)的绑定¹²⁵I-PDGF-AA在存在或不存在过量（1μg/mL）PDGF-AA-40 nM纤维连接蛋白的情况下，在pH 7.5下进行测试，不使用（FN）或使用（FN/Hep）用1μg/mL肝素预处理纤维连接蛋白。对照（Con）孔包括¹²⁵在不存在过量生长因子的情况下的I-PDGF-AA。(B)未经（实线）或经1μg/mL肝素预处理（虚线）的吸附的纤维连接蛋白（40 nM）与0.35 nM至34.5 nM孵育¹²⁵I-PDGF-AA和确定的数量界限(年轴）。注意PDGF-AA有效地自我竞争，其与纤维连接蛋白的结合最大可达0.42 nM，但肝素预处理将其增加至1.07 nM。(C类)在不使用或使用100μg/mL肝素预处理纤维连接蛋白的情况下，检查PDGF-AA在pH 5.5–7.5的条件下与纤维连连接蛋白结合。微孔中不含纤维连接到蛋白（-FN；白色条）、纤维连接蛋白（FN；灰色条）或预处理纤维连接蛋白（FN/Hep；黑色条）。(D类)的绑定¹²⁵在pH值为7（白色条）、8（灰色条）或9（黑色条）的条件下，在0.1–100μg/mL的肝素浓度范围内检测I-PDGF-AA对纤维连接蛋白的作用。(E类)在不进行（−）或（+）1μg/mL肝素预处理的情况下，检测PDGF-AA与三个纤维连接蛋白片段（40 kDa、70 kDa和120 kDa）的结合。在等摩尔浓度（40 nM）下使用全长纤维结合蛋白（FN-FL）和所有纤维结合蛋白片段。无纤维连接蛋白（−FN）。数据代表至少两个独立实验。

**图2。**
肝素酶III治疗扰乱胚胎肠系膜细胞的定向迁移。(A类和B)头部肠系膜细胞定向细胞运动的体外试验。(A类)处理过的基质的制备。第10级的矢状剖面示意图*非洲爪蟾*胚胎。去除支持肠系膜细胞在体内迁移的细胞片（囊胚腔顶）（短箭头表示分离），并将基质面朝下放置在组织培养皿上。组织的位置和方向标记在盘子上。2小时后，取出组织，留下沉积的ECM。(B)定向迁移分析。在第10.5阶段解剖前肠系膜（圆）的外植体，并将其放置在囊胚腔唇（BL）和动物极（AP）标记之间的中点ECM上。立即记录外植体位置，1小时后记录。(C类)迁移试验后，对条件底物进行纤维结合蛋白免疫细胞化学。(D类)肠系膜前外植体的RT-PCR分析。(*E–G公司*)绘制1小时后每个肠系膜外植体的位置，所有起始位置叠加在原点上。积极的年值表示向动物极点的运动，即正常的迁徙方向。(E类)控制(F类)整个实验中包括0.1 U/mL肝素酶III。(*G公司*)ECM沉积后立即用0.1 U/mL肝素酶III处理45分钟。(*H（H）*)中的数据条形图*E–G公司*运动方向：动物极（黑色条）、囊胚唇（灰色条）、侧向（在年轴，但>15μmx个轴线；阴影条），停止（在两个轴上移动小于15μm；白色条）。(我)微注射载体、乙酰肝素酶III或热失活乙酰肝素酶III后，囊胚腔内无凋亡细胞（黑色条）或有凋亡细胞（阴影条）的图形。死胚（白色条）。所有实验至少重复三次。[比例尺，10μm(E类; 应用于框架*C–E类*.)]

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