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.1991年3月;11(3):1214-21.
doi:10.1128/mcb.11.3.1214-1221.1991。

逆转录病毒启动子结合位点的干细胞特异性沉默子

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逆转录病毒启动子结合位点的干细胞特异性沉默子

R彼得森等。 分子细胞生物学. 1991年3月.

摘要

逆转录病毒在胚胎癌(EC)细胞中的表达在病毒生命周期的后整合阶段被阻断,部分原因是该细胞类型中病毒长末端重复启动子的功能不足。然而,在EC细胞中选择逆转录病毒表达已确定位于tRNA引物结合位点(PBS)区域的Moloney小鼠白血病病毒(M-MuLV)发生突变,从而缓解EC细胞特异性抑制。我们发现在重组病毒中用M-MuLV脯氨酸PBS交换谷氨酰胺PBS可以在EC细胞中表达。通过使用重组病毒作为主干,EC细胞特异性阻遏物结合位点(RBS)元件被定位到M-MuLV核苷酸147到174。RBS不需要M-MuLV启动子下游的精确定位,可以在任何方向和内含子中发挥作用,这表明调控作用可能是在DNA水平上,而不是RNA水平上。我们还表明,RBS元件可以从上游位置抑制异源启动子。我们的结果表明,RBS起到了消音器的作用,其抑制作用是由反式作用因子介导的,其作用机制可能是在转录水平上。通过体外结合试验,我们确定了一种特异识别野生型RBS序列的结合因子(结合因子a)。因子A的结合特征表明,它是一种作用于M-MuLV RBS的干细胞阻遏物。我们的DNA-结合分析还确定了一种独特的结合因子(结合因子Hp),它专门识别野生型RBS的半甲基化形式。该因子可能在甲基化介导的EC细胞逆转录病毒表达控制中发挥作用。

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