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.2009年9月24日:(31):1333。
doi:10.3791/1333。

宫内和体外电穿孔法检测小鼠视网膜神经节细胞基因表达

附属公司

宫内和体外电穿孔法检测小鼠视网膜神经节细胞基因表达

蒂莫西·彼得斯等。 J签证费用. .

摘要

视网膜及其唯一的输出神经元视网膜神经节细胞(RGC)是一个很好的模型,可以用来研究细胞分化、轴突引导、视网膜组织和突触形成等生物学问题。一个缺点是无法在体内有效可靠地操纵RGC中的基因表达,特别是在其他可访问的小鼠视觉通路中。转基因小鼠可以用来操纵基因表达,但这种方法往往昂贵、耗时,并且会产生不必要的副作用。在小鸡中,卵内电穿孔用于操纵RGC中的基因表达,以检查视网膜和RGC的发育。尽管在体外培养的新生鼠幼崽、成年大鼠和胚胎鼠视网膜中已经开发出类似的电穿孔技术,但这些策略都不能完全表征体内RGC的发育和轴突的投射。为此,我们开发了电穿孔的两种应用,一种是在子宫内,另一种是在体外,专门针对胚胎小鼠RGCs。通过子宫内视网膜电穿孔,我们可以错误表达或下调RGC中的特定基因,并通过体内视觉通路追踪其轴突投射,从而检查中间靶点(如视交叉)或靶区(如外侧膝状体核)的指导决策。在野生型背景下,干扰RGC子集中的基因表达有助于理解整个视网膜通路的基因功能。此外,我们还开发了一种分析RGC轴突体外生长的配套技术。我们在离体胚胎头部电穿孔,收集并孵育整个视网膜,然后几天后从这些视网膜制备外植体。视网膜外植体可用于各种体外试验,以检查电穿孔RGC轴突对引导线索或其他因素的反应。总之,这套技术增强了我们在RGC中错误表达或下调基因的能力,并将大大有助于研究RGC发育和轴突投射。

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    1. Chalupa LM,Williams RW,编辑。视网膜和老鼠的视觉系统。剑桥:麻省理工学院出版社;2008
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