跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2009年7月；51(1):139-48.
doi:10.1016/j.jhep.2009.03.024。 Epub 2009年5月3日。

肝星状细胞吞噬凋亡体通过JAK/STAT和Akt/NF-kappaB依赖性途径促进其生存

乔伊·X·江 1, 三见贤一郎, Senthil Venugopal公司, 李勇, 娜塔莉·托洛克（Natalie Jörök）
附属公司

肝星状细胞吞噬凋亡体通过JAK/STAT和Akt/NF-kappaB依赖性途径促进其生存

Joy X Jiang先生等。 肝脏病学杂志. 2009年7月.

摘要

背景/目的：我们之前已经证明肝星状细胞（HSC）吞噬凋亡小体（AB）是促纤维化的。由于HSC存活对肝纤维化的进展至关重要，我们的目标是研究吞噬作用是否诱导HSC存活。

方法：在已知凋亡剂存在的情况下，研究吞噬HSC的细胞凋亡。评估JAK/STAT-和PI3K/Akt-依赖性通路、NF-kappaB活化以及抗凋亡蛋白Mcl-1和A1的表达。通过siRNA方法阻断A1后评估细胞凋亡。

结果：吞噬性HSC对FasL/环己酰亚胺或TRAIL诱导的凋亡具有抵抗作用。抑制JAK/STAT或PI3K介导的通路可诱导HSC凋亡。吞噬作用诱导JAK1/STAT3磷酸化，而这可以通过抑制JAK来阻止。JAK抑制也阻断了STAT3向细胞核的转移。Mcl-1表达以JAK依赖的方式上调。Akt的PI3K依赖性磷酸化依赖于NADPH氧化酶活性和超氧物生成。观察到NF-kappaB激活和随后A1的上调，A1抑制诱导HSC凋亡。

结论：AB吞噬作用通过两条途径促进HSC存活，其中A1依赖性更为显著。这代表了一种新的机制，AB的吞噬有助于肝纤维化的传播。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。凋亡体吞噬作用诱导HSC存活
（A）AB暴露对原发性HSC的凋亡率没有改变（3.7%±0。9） 与对照组相比（2.9%±0.2）。FasL（FSL）联合环己酰亚胺（CHX）诱导HSC凋亡增加15.8%（±1.1）。吞噬HSC N+5时，此值降至11%（±1.0），*p<0.001，**p<0.05。（B）TRAIL诱导的原代培养活化HSC的凋亡（50.6%±6.1）在吞噬HSC时显著降低（27.6%±1.8）。凋亡基于活性caspase-3/DAPI染色检测。将数据标准化为控制，设置为1。N=4，**p<0.05
图2
图2。阻断JAK/STAT和/或PI3K通路诱导吞噬细胞HSC凋亡
（A）在有或无AG490（AG）和/或PI3K抑制剂LY294002（LY）的情况下，用TAMRA标记的AB（红色）处理24小时的大鼠原发性HSC，进行DAPI（蓝色）核染色和免疫荧光检测活性caspase-3（绿色）。DMSO处理的细胞作为对照。a）对照组HSC仅DAPI阳性。b）在暴露于AB的HSC中，未检测到活性半胱天冬酶3信号。c）AG490处理的吞噬HSC对活性caspase 3呈阳性，表明凋亡率较高。d）在吞噬暴露于AG490和LY294002的HSC时，进一步诱导细胞凋亡。箭头指向活性caspase-3（绿色）、DAPI（蓝色）和TAMRA（红色）共存的AB。箭头：caspase-3阳性HSC。棒材：10μm。（B）与对照组（2.9%±0.8）相比，AB暴露没有改变凋亡率（4.0%±0.9）。AG490诱导HSC 26.9%（±1.4）的凋亡，LY294002诱导HSC 40.8%（±1.0）的凋亡。联合抑制这两条通路可诱导78.3%（±3.1）的细胞凋亡，通过AB的吞噬作用，凋亡率有所降低，但凋亡率仍然显著（57.4%±2.8）。N=4，*p<0.001。
图3
图3。AB的吞噬作用诱导JAK/STAT磷酸化和STAT3核转位
（A）将LX-2细胞暴露于AB，收集细胞裂解液，使用phosho-JAK1、总JAK1，phospho-STAT3和总STAT3抗体进行免疫印迹。实验表明，AB以时间依赖的方式降低JAK1和STAT3磷酸化。（B）作为阳性对照，瘦素（75ng/ml，10min）诱导LX-2细胞中JAK1和STAT3的磷酸化。（C）用抗STAT3抗体对大鼠原发性HSC进行免疫细胞化学。（a） 在对照细胞（未接触AB）中，STAT3是细胞质。（b，c）AB诱导的HSC STAT3核转位孵化，通过STAT3和DAPI信号的共定位检测到（d）AG490处理AB暴露的HSC抑制STAT3转位。STAT3：绿色，DAPI：蓝色。棒材：20μm。（D）通过LY294002预孵育HSC抑制PI3K活性，也可以部分抑制JAK1和STAT3磷酸化，这表明两条信号通路之间存在串扰。
图4
图4。AB的吞噬作用诱导HSC中Mcl-1的表达
在AG490存在或不存在的情况下，用AB治疗原代大鼠HSC 24小时。对细胞溶质提取物进行Western blot分析，以检测Mcl-1表达的变化。AB处理细胞中Mcl-1表达增加；用JAK抑制剂AG490对细胞进行预孵育可以抑制这一现象。IL-6治疗被用作Mcl-1表达的已知诱导剂。密度测定显示，AB的吞噬作用诱导表达增加1.8倍（±0.3），归一化为β-肌动蛋白，呈重叠对照。N=4，*p<0.05。
图5
图5。AB吞噬作用诱导ROS生成和Akt磷酸化
（A）LX-2细胞与AB孵育6小时，并使用细胞色素c分析评估ROS生成。与对照组相比，AB的吞噬作用诱导了2.2±0.4倍的超氧物活性。N=4，*p<0.05。（B）将LX-2细胞暴露于含或不含罗布青素（NADPH氧化酶抑制剂）、AG490或LY294002的AB，并收集细胞裂解物，使用phosho-Akt和总Akt抗体进行免疫印迹。AB瞬时诱导Akt磷酸化，分别被罗布青素和LY294002阻断，但AG490未阻断。
图6
图6。AB吞噬作用诱导NF-κB活化
将LX-2细胞在无血清培养基中孵育，然后暴露于AB，无论是否预先与CAPE（1ng/ml，14小时）、LY294002（600 nM，1小时）、AG490（50μM，1小时）或罗布麻素（100μM，1小时）预孵育。LX-2细胞吞噬AB可显著激活NF-κB（3.65±0.55倍），这可被CAPE、PI3K抑制所抑制，也可在较小程度上被JAK和NADPH氧化酶抑制所抑制。密度测定显示了3个实验的数据*p<0.005
图7
图7。A1在吞噬肝星状细胞中被诱导表达
（A）LX-2细胞在有或无LY294002或AG490的情况下暴露于AB。Western blot分析抗凋亡蛋白A1的表达。（B）定量密度分析表明，AB的吞噬作用上调了A1的表达（1.7±0.2倍），这是通过阻断PI3K活性而被抑制的。然而，抑制JAK通路对A1表达N=4的影响不大，*p<0.05。为了研究A1的抗凋亡作用，将A1 siRNA（30 nM）转染原代大鼠HSC并暴露于AB。（C）Western blot分析显示小干扰RNA抑制A1表达。（D）在存在或不存在FasL和环己酰亚胺的情况下，用加扰（Scr）或A1 siRNA（A1si）转染原代HSC，暴露于AB。Caspase-3/DAPI染色评估细胞凋亡。Scr+AB组细胞凋亡率为（14.1%±0.8）。FasL和CHX使其增加（29.6%±1.2）。A1 siRNA转染在基线（仅AB暴露细胞）和FasL/CHX治疗后诱导较高的凋亡率（42.1%±0.7）。平均值±SED，N=4，*p<0.001，**p<0.005。
图8
图8。HSC吞噬AB诱导不同的生存途径
AB的吞噬诱导JAK1/STAT3介导的生存途径，导致Mcl-1的上调。吞噬作用也诱导Akt磷酸化通过PI3K，这有助于NF-κB的激活。因此，A1抗凋亡蛋白在吞噬HSC时以PI3K依赖的方式上调。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Friedman SL。星状细胞：肝纤维化发生中的移动靶点。肝病学。2004;40:1041–1043.-公共医学
    1. Wright MC、Issa R、Smart DE、Trim N、Murray GI、Primrose JN等。胶质毒素刺激人和大鼠肝星状细胞的凋亡，并增强大鼠肝纤维化的解决。胃肠病学。2001;121:685–698.-公共医学
    1. Iredale JP、Benyon RC、Pickering J、McCullen M、Northrop M、Pawley S等。大鼠肝纤维化自发消退的机制。肝星状细胞凋亡和金属蛋白酶抑制剂在肝脏的表达降低。临床投资杂志。1998;102:538–549.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Anan A、Baskin-Bey ES、Bronk SF、Werneburg NW、Shah VH、Gores GJ。蛋白酶体抑制诱导肝星状细胞凋亡。肝病学。2006;43:335–344.-公共医学
    1. Novo E、Marra F、Zamara E、Valfre di Bonzo L、Monitillo L、Cannito S等。活化的人类肝星状细胞过度表达Bcl-2：作为人类进行性肝纤维化机制的细胞凋亡抵抗。内脏。2006;55:1174–1182.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语