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.2009年1月;276(2):466-78.
doi:10.1111/j.1742-4658.2008.06789.x。

富含亮氨酸重复激酶2的酶学性质和新检测方法研究

附属公司
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富含亮氨酸重复激酶2的酶学性质和新检测方法研究

瓦桑提·萨南德等。 FEBS J公司. 2009年1月.
免费文章

摘要

富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)的突变是常染色体显性帕金森病的主要病因,发病年龄和症状与特发性帕金森病相同。其中一些致病性突变被认为会影响其激酶活性,因此了解LRRK2的作用及其激酶活性的调节,可能会导致治疗帕金森病的新治疗策略。在本研究中,使用了高度纯化的杆状病毒表达蛋白,首次提供了大量蛋白质,能够对LRRK2的激酶活性进行彻底的酶表征。尽管LRRK1经历了微弱的自磷酸化,但它对肽底物LRRKtide、,这表明它是一种催化效率高的激酶。我们还利用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析格式(Lantha-ScreenTM)来表征LRRK2并测试非选择性激酶抑制剂的作用。最后,我们使用放射和TR-FRET分析来评估影响LRRK2激酶活性的临床突变的作用。我们的结果表明,只有最常见的临床突变G2019S导致以LRRKtideas为底物的激酶活性强烈增强。这种突变也影响ATP与LRRK2的结合,野生型结合比G2019S突变体更紧密(Km,app为57lm)(Km,app为134lm)。总的来说,这些研究描述了LRRK2作为激酶的催化效率,并提供了确定帕金森病治疗药物的策略。

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