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.2009年2月20日；284(8):4760-6.
doi:10.1074/jbc。M805464200。 Epub 2008年12月12日。

谷胱甘肽调节视网膜胶质（muller）细胞的自分泌和旁分泌促炎反应

梅丽莎·谢尔顿 1, 安妮·M·迪斯特, 蒂莫西·科恩, 约翰·梅亚尔
附属公司

谷胱甘肽调节视网膜胶质（muller）细胞的自分泌和旁分泌促炎反应

梅丽莎·谢尔顿等。 生物化学杂志. .

摘要

蛋白质S-谷氨酰化是一种可逆的氧化还原依赖性翻译后修饰。许多细胞功能和信号转导途径涉及半胱氨酸依赖性活性受谷胱甘肽酰化调节的蛋白质。谷胱甘肽氧合酶（Grx1）在这种调节中起着关键作用，因为它是一种特异而有效的脱谷胱甘氨酸化催化剂。我们最近报道了糖尿病大鼠视网膜和高糖培养的大鼠视网膜Müller胶质细胞（rMC-1）中Grx1的增加。Grx1的这种上调伴随着NF-κB的激活和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的诱导。在正常葡萄糖中，通过腺病毒定向上调细胞中Grx1的表达，可以复制这种促炎反应。NFkappaB的调节位点定位于细胞质，其中IkappaBkinase（IKK）是NFkappa B活化的主调节器。在目前的研究中，抑制IKK活性消除了高糖或腺病毒定向上调Grx1诱导的ICAM-1的增加。将来自过度表达Grx1的Müller细胞的条件培养基添加到Müler细胞或内皮细胞的新鲜培养物中，并诱导这些细胞中Grx1和ICAM-1蛋白的增加。这些效应与一项新发现有关，即在Grx过度表达细胞的培养中，白细胞介素-6的分泌增加。此外，纯白细胞介素-6增加了rMC-1细胞中的Grx1和ICAM-1。因此，Grx1似乎在自分泌和旁分泌促炎反应中发挥重要作用。此外，在正常葡萄糖培养基中从Müller细胞分离的IKKbeta在Cys-179上被谷胱甘肽化。因此，Grx介导的通过脱谷氨酸硫基化激活IKK可能在体内Grx1增加的糖尿病并发症中发挥中心作用。

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数字

图1。
图1。
IKK抑制对培养的rMC-1细胞ICAM-1表达的影响在高糖中。rMC-1细胞在高糖（25米米)培养基培养5天，用Bay 11-7085处理(海湾)在孵育的第2至3天持续5-10分钟。代表性西方ICAM-1和肌动蛋白负载控制的印迹以及印迹的量化是如图所示(n个= 12). 表达ICAM-1的高糖细胞在正常葡萄糖培养基中生长的细胞的近2倍（±0.6），*，第页≤ 0.002. 10和20μ米海湾抑制剂11-7085在高葡萄糖处理的细胞中，ICAM-1表达从高不含抑制剂的葡萄糖处理细胞，第页≤0.03.
图2。
图2。
IKK抑制对Grx1过度表达ICAM-1表达的影响rMC-1电池。在正常葡萄糖（5 m）中培养rMC-1细胞米)培养基并用Bay 11-7085预处理(海湾)30–40分钟。然后立即用10个Ad-Grx1的m.o.i感染细胞或Ad-Empty，在正常葡萄糖培养基中培养16–24小时，以及收集在Nonidet P-40裂解缓冲液中，用于ICAM-1的免疫印迹（1:1000）和肌动蛋白（1:30000）(n个= 7). Ad-Grx1通过2.6倍（±0.5），*，第页< 0.01. ICAM-1表达用10μ米11-7085湾统计学上有所增加，但用20μ米海湾11-7085以与对照细胞相似的数量表达ICAM-1（无腺病毒和Ad-Empty m.o.i of 10）。此外，感染Ad-Grx1和用10μ和20μ处理米抑制剂明显减少来自不含抑制剂的Ad-Grx1感染细胞，#，第页< 0.01.
图3。
图3。
IKK抑制对NFκB p50和Grx1中p65过度表达rMC-1细胞。rMC-1细胞培养于正常葡萄糖（5米米)介质，用Bay 11-7085预处理(海湾)Grx1过度表达前30分钟，立即感染用10个Ad-Grx1或Ad Empty的m.o.i.，在正常葡萄糖培养基，收集。细胞被分离成细胞核组分，在12%SDS-PAGE上运行，并对p50（1:1000）、p65进行免疫检测（1:3000）和核负荷控制YY1（1:1000）。Ad-Grx1增加细胞核p50增加4倍（±0.7）(n个= 9) (面板一), *,第页≤ 0.002. 用10和20μ米海湾11-7085从不含抑制剂的Grx1-过表达细胞(n个=9）(面板一), #,第页< 0.02. Ad-Grx1使细胞核中的p65增加接近2倍（±0.7）(n个= 11) (面板b), *,第页≤ 0.002. 用10和20处理过表达Grx1的细胞μ米海湾11-7085从不含抑制剂的Grx1-过表达细胞(n个= 11) (面板b条), #,第页< 0.02.
图4。
图4。
体外培养的rMC-1细胞中IKKβ的谷胱甘肽酰化正常葡萄糖培养基。IKKβ被免疫沉淀(知识产权)英寸正常葡萄糖培养的rMC-1细胞中碘乙酰胺的存在培养基和免疫印迹(工作分解结构)在非还原条件下(一)。免疫沉淀IKKβ是S公司-谷胱甘肽酰化Cys-179，如409处光谱上的峰值所示米/z（z）属于通过液相色谱-串联质谱获得肽序列(b条).C类(供过于求),S公司-谷胱甘肽半胱氨酸；吨苏氨酸；S公司(磷)，磷酸丝氨酸；F类，苯丙氨酸。
图5。
图5。
ICAM-1在大鼠TRiBRB内皮细胞中的表达来自Grx1过表达大鼠rMC-1细胞的条件培养基。rMC-1电池用Ad-Grx过度表达Grx1，分别在10分之一或20分之一培养基中培养并收集条件培养基（C.M.）。放置了C.M在TRiBRB内皮细胞上培养24小时，然后处理细胞裂解液蛋白质印迹分析。来自过度表达两种浓度的rMC-1细胞的C.MGrx1（Ad-Grx1 m.o.i为10，m.o.i.为20）增加了2.1倍Grx1分别为（±0.4）和2.8倍（±0.6）(n个=4), *,第页≤ 0.05. ICAM-1增加1.5倍（±0.2）和2.6倍（±0.4），以响应来自rMC-1细胞的条件培养基分别在10或20的m.o.i.过度表达Grx1(n个= 7), *,第页≤ 0.03.
图6。
图6。
经条件培养基处理的rMC-1细胞中ICAM-1的表达Grx1过度表达rMC-1细胞。转染rMC-1 Müller细胞在m.o.i为10或m.o.i.为20时使用Ad-Grx或Ad-Empty，且C.m.为24小时后从这些细胞中收集到C.M.，然后放置在新培养的细胞上rMC-1 Müller细胞24小时，细胞裂解液处理蛋白质印迹分析。来自rMC-1的C.M.过度表达两种浓度的Grx1（Ad-Grx1 m.o.i为10，m.o.i.为20）导致增长2.4倍Grx1分别为（±0.6）和2.9倍（±0.7）(n个=6), *,第页≤ 0.03. ICAM-1增加1.7倍（±0.3）和2.2倍（±0.5），以响应来自rMC-1细胞的条件培养基分别在10或20的m.o.i.过度表达Grx1(n个= 6), *,第页≤ 0.04.
图7。
图7。
rMC-1细胞中Grx1对细胞因子的调节。细胞因子表达正常葡萄糖培养基中过表达Grx1的rMC-1细胞培养基通过多重细胞因子Luminex酶联免疫吸附测定检测（ELISA），并从相同的培养基样品中分析VEGF蛋白使用VEGF ELISA。TNF-α、IFN-γ、IL-1β和IL-10的释放未检测到介质中(面板a)。IL-6和VEGF均为在培养基中检测到，但只有IL-6是由Müller细胞中的Grx1(面板a)。rMC-1米勒细胞用Ad-Grx在10个m.o.i.的培养基中过度表达Grx1，培养24小时正常葡萄糖培养基。然后收集细胞培养基，进行浓缩3倍，并在IL-6 ELISA中进行测试。来自rMC-1米勒细胞的培养基过表达Grx1表明IL-6增加了3.7倍（±0.5）空白对照载体转染细胞的表达（Ad-Empty）或未翻译（0）(面板b)(n个= 6) *,第页=0.003。重组IL-6诱导Grx表达的治疗乘以1.5倍（±0.2），ICAM-1乘以2.1倍（±0.4）*，第页≤ 0.03 (n个= 8) (面板c).
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    1. Gravina，S.A.和Mieyal，J.J.（1993）《生物化学》32 3368–3376-公共医学
    1. Gallogly，M.M.和Mieyal，J.J.（2007），货币。操作。药理学。7 381–391-公共医学
    1. Shelton，M.D.、Chock，P.B.和Mieyal，J.J.（2005）《抗氧化剂》。氧化还原信号。7 348–366-公共医学
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