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.2008年11月;8(11):1957-62.
doi:10.1039/b807762b。 Epub 2008年8月29日。

基于疏水性聚羟基脂肪酸纳米粒子纯化重组蛋白的新型自分裂相蛋白标签

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基于疏水性聚羟基脂肪酸纳米粒子纯化重组蛋白的新型自分裂相蛋白标签

王志辉等人。 实验室芯片. 2008年11月.

摘要

利用微生物聚羟基脂肪酸(PHA)颗粒相关蛋白相蛋白、一种pH诱导的自分裂内含物和PHA纳米粒子开发了一种新的蛋白质纯化方法。将待生产和纯化的靶蛋白基因与内含子和相蛋白基因融合,这些基因在体内联合过表达,例如在本研究中的大肠杆菌细胞中。重组大肠杆菌产生的含有目标蛋白、内含子和相蛋白的融合蛋白与所有其他大肠杆菌蛋白通过细菌裂解过程一起释放。然后在体外将其吸附到与细胞裂解物孵育的疏水性聚合物纳米粒子的表面。通过离心浓缩附着融合蛋白的纳米粒子。然后,通过内部蛋白的自裂解释放出合理纯化的目标蛋白,并通过简单的离心过程与纳米粒子分离。利用该系统,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、麦芽糖结合蛋白(MBP)和β-半乳糖苷酶分别以活性形式成功纯化,且产率合理,证明了该纯化系统的有效性和可靠性。这种方法允许以低成本连续生产和纯化高附加值蛋白质。

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