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.2008年6月25日；28(26):6633-41.
doi:10.1523/JNEUROSCI.1280-08.2008。

Jxc1/Sobb编码一种核锌指蛋白，对耳蜗生长、细胞命运和皮质器官的模式至关重要

郑晨 1, 米雷尔·蒙库基奥, 雷内·卡尔德隆, 南希·A·詹金斯, 尼尔·G·科普兰, 马修·凯利, 康拉德·诺本·特劳斯
附属公司

编码核锌指蛋白的Jxc1/Sobp对耳蜗生长、细胞命运和皮层器官的模式化至关重要

郑晨等。 神经科学. .

摘要

小鼠耳蜗从耳囊腹极伸出，形成一个四分之一线圈。对控制耳蜗生长的因素知之甚少。Jackson circler（jc）是一种隐性突变，在胚胎发育第13.5天耳蜗管生长停滞导致耳聋。在这里，我们在jc位点鉴定了果蝇Sobp（正弦眼结合蛋白）基因（命名为Jxc1）的脊椎动物同源物。Jxc1编码一个具有两个FCS型锌指结构域（PS51024）的核蛋白，具有核定位信号和高度保守的序列基序。瞬时表达的野生型蛋白靶向细胞核，但突变亚型在细胞质中定位错误。在jc突变体中，Corti器官的细胞模式被严重破坏，在顶端显示多余的毛细胞，Corti隧道和内部毛细胞的镜像复制，并在科利克器官内表达异位前庭样毛细胞。在内耳感觉毛细胞、支持细胞和听神经节中检测到Jxc1 mRNA。在发育中的视网膜、嗅上皮、三叉神经节和毛囊中也有表达。总之，我们的数据支持Jxc1在控制耳蜗生长、细胞命运和Corti器官模式的关键步骤中的作用。

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数字

图1。
图1。
遗传和物理地图jc公司轨迹。A类，从上到下显示了10号染色体（MMU10）上包含0.9 cM的遗传区域jc公司由标记定义的间隔D10密特108和D10密特55。物理地图显示了D10N特拉：用于遗传作图的标记、重组事件的大致位置（填充卵形）和220kbjc公司最小间隔。从UCSC基因组浏览器（2007年7月鼠标组装）获得的物理坐标显示在左侧和右侧，以千为单位。显示了用于生成转基因株系的BAC克隆的位置和名称，以及预测外显子和开放阅读框的近似位置。给出了指示转录方向的三个基因的位置和大小。Scml4（Scml4），性感梳在大腿中部，如4。的内含子/外显子结构Jxc1型（BC059851），编码外显子（填充框），非翻译区（UTR），碱基对中外显子的长度，外显子数量（1-7），以及jc公司和jc公司2J型显示了突变。B类，C57BL/6J-+/+和jc公司/jc公司突变基因组DNAjc公司第6外显子突变。显示10 bp缺失（c1346–1355del）。C类，C57BL/6J-+/+和受影响的序列记录道jc公司2J型突变小鼠。G-to-T替换的位置由箭头指示。
图2。
图2。
Jxc1的结构域和基序结构。A类，示意图显示了Jxc1的外显子、突变、基序和结构域的位置。NLS，核定位信号；ZF，锌指；PR，脯氨酸富集区。jc公司和jc公司2J型突变用红色表示。标尺用氨基酸表示。这个Jxc1型GenBank注册号为DQ157775。B类所示为预测锌指区域的ClustalW对齐。保守半胱氨酸（C）和FCS残基分别以蓝色和红色突出显示。连字符表示序列中的间隙。星号表示保守的残留物。ZF1，JXC1的Zinc-finger域1；L3MBTL2，人类l（3）mbt-like 2（GenBank登录号Q969R5）；PHC1–PHC3，小鼠多同源异型体样1–3（GenBank登录号分别为Q64208、Q9QWH1和Q8CHP6），SCM，小鼠中腿上的性梳（GenBank登录号Q9VHA0）；和ZFP198、人ZFP198（GenBank登录号CAH7013）。
图3。
图3。
Jxc1是针对细胞核的。A类，图示融合蛋白的设计和Jxc1表位的位置。B类，COS细胞转染GFP标记的野生型Jxc1蛋白和表达jc公司和jc公司2J型截短GFP融合蛋白。固定COS细胞也用Jxc1（Pb544）抗体染色。细胞核显示为蓝色，GFP结构域显示为绿色，抗体染色显示为红色通道。
图4。
图4。
耳蜗发育不良jc公司突变体。A类，内耳注射乳胶漆+/jc公司和jc公司/jc公司胚胎第15.5天。注意缩短的耳蜗（箭头）顶端的球状结构。B类,C类，P12的耳蜗导管(+/jc公司,jc公司/jc公司)和第14页(jc公司2J型/jc公司2J型)展示的是老鼠。请注意jc公司2J型突变体比in短jc公司.耳蜗线圈用虚线表示。D–F图中显示了甲苯胺蓝O染色的Corti器官的塑料切片。Corti器官在3周龄时正常发育+/jc公司老鼠(D类). 描述了IHC（ih）、OHC（oh）、Deiter细胞（dc）、内（ip）和外（op）柱细胞、顶盖膜（tm）和Corti隧道（tc）的位置。中尖区jc公司显示四行OHC(E类)、异位IHC（eih）和外侧边缘异位外柱细胞（eop）。在顶端区域，可以看到多余的OHC（oh，括号）和Deiter细胞（dc，括号）(F类).G–M公司Corti表面准备器官的共焦图像。S100A1（绿色）和阴茎倍体素染色显示Corti的正常发育器官jc公司杂合子(G公司)带有一行IHC（ih，括号）和三行OHC（oh，托架）。在中底，英寸jc公司纯合子，仅出现两排OHC的短延伸(H（H）). 用抗肌球蛋白VI抗体（一种分化毛细胞的标记物；红色）染色可识别出位于中尖区的四行OHC和位于更尖区的多达六行OHC(J型). 黄嘌呤染色（红色）jc公司2J型Corti器官在中尖区显示四排OHC（比较+/jc公司2J型具有jc公司2J型/jc公司2J型;K（K）,L（左）)以及OHC在顶点的无组织模式(M（M）). 比例尺：A–C500微米；D–F型，50微米；G–K型，10微米。
图5。
图5。
Corti和内部毛细胞的异位隧道。A–HCorti全山制剂器官的共焦图像。P0岁时心尖区S100A1（绿色）和阴茎倍体蛋白（红色）染色；A类)显示了OHC行（oh，括号）的无序模式，如果IHC位于Corti器官的外侧（L）侧，则会出现拉伸。内侧（M）侧IHC的位置如图所示（ih，括号）。B类，四个IHC（ih、括号和箭头）中间位置的放大倍数更高。C类，位于Corti器官外侧的IHC（eih、括号和箭头）。D–H型，根尖中部的免疫染色(D类)和顶端区域(E–H（E–H）)第页，共页jc公司/jc公司p75在P3NTR公司（红色；卵磷脂，绿色）。D–F型，指示内侧柱状细胞的位置（pc，箭头）。E类，Corti器官外侧的一排异位柱状细胞被染色（epc，箭头）。F类,G公司，pc和epc的高倍图像如所示E类.I–K型，塑料切片用甲苯胺蓝O染色。我、正常位置的IHC（ih）、内（ip）和外（op）柱细胞、Corti隧道（tc）和Hensen细胞（hc）jc公司杂合子。J型,K（K），输入jc公司突变体，Corti的未成熟通道显示在内侧(J型)外侧显示由异位的外（eop）和内（eip）柱细胞形成的Corti（etc）异位隧道，然后是IHC(K（K）). 注意异位IHC的静纤毛束（箭头所示）。比例尺：A–H，10微米；I–K型，50微米。
图6。
图6。
科利克器官中的前庭样毛细胞。A类低倍镜下观察科尔蒂器官（支架）和科利克器官中的一组异位毛细胞（插图箭头所示），这些毛细胞被类阴茎激素染色。B类科利克器官异位毛细胞斑块的高倍视图。注意前庭样的静纤毛束（箭头），F-actin在顶端表面的积聚，以及玫瑰花状细胞的形成（星形）。C类，毛细胞的高倍放大图描绘了使人联想到前庭毛细胞的静纤毛束（箭头）。D类,E类胞果的磷灰石染色+/jc公司(D类)和jc公司/jc公司(E类)在P0处。F类,G公司，甲苯染色塑料型材+/jc公司和jc公司/jc公司球囊(F类)和胞果(G公司)如图所示。括号表示神经上皮增厚。H（H）图中显示了球囊和椭圆囊的斑的平均±SEM厚度jc公司杂合突变体和纯合突变体。星号表示显著差异(第页< 0.05;t吨测试）。三个代表性章节中的十个+/jc公司和两个jc公司/jc公司对耳朵进行了测量。比例尺：A类,B类，10微米；C类，5微米；D类,E类，50微米；F类,G公司，300微米。
图7。
图7。
Jxc1型在感觉上皮和神经元上皮中表达。A–F,H–K型，mRNA就地杂交使用Jxc1型反义(A–F,H–K)和感觉(我)探针。se，感觉上皮；螺旋神经节；oc，Corti器官；sv，血管纹；ger，上皮嵴较大；小上皮嵴；mu，胞斑；ac，壶腹嵴；onl，外核层；inl，内核层；tg，三叉神经节；hf，毛囊；嗅上皮；nfl、神经纤维层。我，有感觉的染色Jxc1型探针未产生明显信号。G公司，我们使用Lfng公司作为耳蜗感觉区的标记物。
图8。
图8。
Jxc1型成人组织中的表达谱。A类,Jxc1型成人和整个胚胎组织中的mRNA水平。直方图显示了Jxc1型相对于耳蜗中的水平，在每个指示组织中。条形图表示六个实时PCR扩增的平均值和标准差。B类，实时PCR分析Jxc1型在指定组织中表达。M、 分子量标记。显示了六个代表性实验中的一个。C类、C57BL/6J（B6）和jc公司杂合突变体和纯合突变体。棒材是至少四个平行测试的平均值±SEM。
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