跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2008年3月4日；105(9):3362-7.
doi:10.1073/pnas.0705842105。 Epub 2008年2月22日。

Myocardin通过抑制NF-kappaB（p65）依赖性细胞周期进程抑制细胞增殖

如虹堂 1, 西龙正, 托马斯·E·卡利斯, 威廉·斯坦斯菲尔德, 嘉荫河, 阿尔伯特·S·鲍德温, 王大志, 克雷格·H·塞尔兹曼
附属公司

Myocardin通过抑制NF-kappaB（p65）依赖性细胞周期进程抑制细胞增殖

汝杭汤等。 美国国家科学院程序. .

摘要

我们之前报道了血清反应因子（SRF）辅因子心肌蛋白在控制肌肉基因表达中的重要性，以及炎症转录因子NF-kappaB在控制细胞命运中的基本作用。心肌失活与恶性肿瘤的生长有关。然而，心肌蛋白调节细胞生长的潜在机制尚不清楚。在这里，我们显示NF-kappaB（p65）以CArG-box依赖的方式抑制心肌和平滑肌基因的心肌激活。与它们的功能相互作用一致，p65直接与心肌蛋白相互作用，并在体内外抑制心肌蛋白/SRF/CArG三元复合物的形成。相反，心肌蛋白通过干扰p65 DNA结合降低p65介导的靶基因激活，并消除LPS诱导的TNF-α表达。重要的是，心肌蛋白通过干扰NF-kappaB依赖的细胞周期调节来抑制细胞增殖。总之，这些发现确定了心肌蛋白作为SRF非依赖性转录抑制因子和细胞周期调节因子的功能，并提供了NF-kappaB和心肌蛋白之间的相互作用在调节细胞增殖和分化中发挥中心作用的分子机制。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
p65抑制心肌蛋白转录活性。SM22和ANF控制的荧光素酶报告子转染COS7细胞(一)或大鼠新生心肌细胞(b条)并与肌钙蛋白表达质粒（0.1μg）共转染，增加p65的数量（COS7:0.01、0.05、0.1和0.2μg；心肌细胞：0.02和0.1μg。蛋白质印迹法检测p65蛋白。(c（c）)COS7细胞与SM22或ANF启动子内指定的已删除CArG盒共转染。(d日和e（电子）)COS7细胞(d日)或心肌细胞(e（电子）)用TNF-α治疗（10 ng/ml，持续6 h）或用IκBα超阻遏物联合转染。数值是至少三个实验中荧光素酶活性相对于报告者单独激活的倍数。学生的t吨测试：P（P）<0.05，单用肌钙蛋白vs.肌钙蛋白加p65、TNF-α或IκBα-SR。
图2。
图2。
p65和心肌蛋白之间的物理相互作用。(一)用编码与GAL4和UAS萤光素酶报告基因融合的全长肌球蛋白的表达质粒转染的COS7细胞，带有或不带有p65的表达质粒。数值是至少三个实验中荧光素酶活性相对于报告者单独激活的倍数。学生的t吨测试：P（P）<0.05，Gal4肌苷与Gal4肌苷加p65相比。(b条)抗-Myc抗体在用抗Flag抗体制备的免疫沉淀物和转染Flag-p65和Myc-myocardin表达质粒的COS7细胞中检测到心肌蛋白。(c（c）) (左侧)显示了与下拉分析中GST和GST-心肌蛋白量相对应的考马斯汀染色蛋白。(赖特)p65与心肌蛋白结构域相互作用概述。(d日)显示1/20输入用于下拉分析的放射性标记p65蛋白的自射线照片。(e（电子）)全长和截短p65与GST-心肌蛋白的相互作用(左侧)仅GST(赖特). (（f）)心肌蛋白与p65结构域的相互作用概述。
图3。
图3。
p65抑制心肌蛋白/SRF/CArG三元复合物的形成。(一)Myc-tagged mycardin、Flag-taged p65和SRF蛋白通过在体外转录和翻译，与放射性标记探针孵育，并进行凝胶迁移率变化分析。(b条)随着p65含量的增加，进行凝胶迁移率变化分析(左侧)和心肌蛋白(赖特). (c（c）)用含有或不含LPS的小鼠心脏进行凝胶迁移率变化分析。应用抗-SRF抗体进行超移位。蛋白质印迹分析p65蛋白。
图4。
图4。
肌球蛋白抑制p65转录活性。(一)用荧光素酶报告子构建的三个串联κB位点或其突变体转染COS7细胞，以及p65（0.1μg）、心肌蛋白（0.1和0.2μg）或两者的表达质粒。数值是荧光素酶活性相对于报告者单独激活的倍数。误差条表示至少三个实验的SD。学生的t吨测试：P（P）<0.05，p65单独组与p65加心肌梗死组。(b条)凝胶迁移率变化分析使用32P-标记的κB探针，稳定水平为在体外翻译的p65有或没有增加数量在体外翻译的心肌蛋白。(c（c）)主动脉VSMC感染越来越多的腺病毒心肌蛋白（感染倍数：20、50和200）48小时，然后用LPS（1μg/ml）刺激2小时。对提取的蛋白质进行蛋白质印迹。
图5。
图5。
肌卡蛋白抑制CHO细胞增殖。(一)在用Dox或不用Dox处理后72小时，对携带肌卡蛋白诱导系统的细胞数量进行计数(n个= 7). *,P（P）< 0.01. (b条)将细胞处理3天，用BrdU脉冲标记60分钟，并用BrdU染色（用于细胞计数和BrdU实验(n个= 7). *,P（P）< 0.01. (c（c）)通过激光扫描细胞术获得的M33 CHO细胞24小时处理后的代表性DNA直方图(d日)两个G中的单元格数2–通过细胞术检测到的M期和多倍体细胞区域(n个= 5). *,P（P）< 0.01. (e（电子）)用相应抗体进行Western blot，检测有（+）和无（−）Dox治疗3天的细胞中的细胞周期调节蛋白。
图6。
图6。
内源性心肌蛋白对VSMC生长的影响。(一)含有四环素调节（TR）诱导系统的VSMC及其主要阴性心肌细胞经Dox和不经Dox处理24小时的显微照片(b条)对照组（TR）、肌钙蛋白（Myocd）和表达VSMC的显性阴性（Myocd-DN）在3天内计数的细胞数(n个= 5). *,P（P）< 0.01. (c（c）)用siRNA转染小鼠主动脉VSMC至心肌或p65，持续24小时。实时PCR检测mRNA表达的相对折叠变化（归一化为18s rRNA）。数值是相对于至少三个实验的对照，mRNA表达的相对倍数变化。P（P）siRNA与对照组和siRNA心肌蛋白与siRNA p65均<0.05。(d日)VSMC在转染心肌蛋白或p65 siRNA后48小时直接计数。误差条代表五个实验的SD。P（P）siRNA与对照组和siRNA心肌蛋白与siRNA p65均<0.05。(e（电子）)平衡NF-κB（p65）和心肌蛋白对细胞生长和分化的调节的工作模型。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 奥尔森EN。心脏进化和发育中的基因调控网络。科学。2006;313:1922–1927.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Miano JM。血清反应因子：在不同的基因表达程序之间切换。分子细胞心血管杂志。2003;35:577–593.-公共医学
    1. Posern G，Treisman R.Actin’together:血清反应因子及其辅助因子和与信号转导的联系。趋势细胞生物学。2006;16:588–596.-公共医学
    1. Wang DZ，Olson EN。肌钙蛋白家族转录辅激活物对平滑肌发育的控制。2004年通用操作基因开发；14:558–566.-公共医学
    1. Callis TE，Cao D，Wang DZ。骨形态发生蛋白信号调节心肌基因的心肌反式激活。Circ Res.2005；97:992–1000.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语