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.2007年12月;7(23):4228-34.
doi:10.1002/pmic.200700038。

一种新型串联亲和纯化策略,用于天然蛋白复合物的高效分离和表征

附属公司

一种新型串联亲和纯化策略,用于天然蛋白复合物的高效分离和表征

克里斯蒂安·约翰内斯·格洛克纳等。 蛋白质组学. 2007年12月.

摘要

天然多蛋白复合物的分离和分离是功能基因组学的中心主题。串联亲和纯化(TAP)标签的开发使天然蛋白复合物的高效大规模纯化成为可能。然而,TAP标签的尺寸为21 kDa,需要花费大量时间进行切割。通过将串联Strep-tag II与FLAG-tag相结合,我们能够将TAP(SF-TAP)标签的大小减少到4.6 kDa。这两个部分对其固定的结合伙伴具有中等亲和力和亲和力。这允许在自然条件下,第一步使用去硫生物素,第二步使用FLAG八肽洗脱SF标记的蛋白质。SF-TAP协议代表了在2.5小时内从哺乳动物细胞中高效、快速、直接地纯化蛋白质复合物。通过从HEK293细胞中纯化Raf相关蛋白复合物,以及随后通过剖析Raf结合伙伴MEK1和14-3-3的相互作用模式分析其蛋白质相互作用网络,证明了这种新方法的威力。

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