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.2007:390:363-71.
doi:10.1007/978-1-59745-466-724。

监测酵母自噬:Pho8Delta60分析

附属公司

监测酵母自噬:Pho8Delta60分析

丹尼尔·克林斯基. 分子生物学方法. 2007.

摘要

自噬是真核细胞中普遍存在的降解过程。它参与各种发育程序,也与人类病理生理学有关。基本过程包括形成细胞溶质双膜囊泡,称为自噬体。自噬体隔离大量细胞溶质,完成后其外膜与溶酶体/液泡的限制膜融合。融合事件将内部单膜小泡释放到溶酶体/液泡腔中,小泡现在被称为自噬体。自噬体及其货物通常被降解,产生的小分子被回收用于随后的胞浆中。自噬是唯一能够降解整个细胞器的途径。因此,它可能在预防由包括线粒体在内的细胞器受损或大蛋白聚集体积累引起的病理学方面发挥关键作用,例如发生在某些类型的神经退行性疾病中。本文描述了一种检测酵母中大量自噬的方法。标记蛋白是空泡酶碱性磷酸酶Pho8的细胞溶质衍生物。在摄取到液泡中后,前体酶在C末端被切割以产生活性形式。在转移到诱导自噬的条件之前和之后,对表达Pho8胞浆形式Pho8Delta60的细胞进行碱性磷酸酶活性测定。

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