跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2007年8月1日；67(15):7203-11.
doi:10.1158/0008-5472.CAN-07-0473。

ELMO1和双组Rac1鸟嘌呤核苷酸交换因子Dock180促进人脑胶质瘤细胞侵袭

迈克尔·贾辛卡 1, 薄虎, 郭敏慧, 伊法特·巴·约瑟夫, 顾伟松, Takanori Hirose公司, 丽莎·B·哈尼, 科迪·S·拉维坎德兰, 西川良彦, 石远成
附属公司

ELMO1和Dock180，一种二分Rac1鸟嘌呤核苷酸交换因子，促进人类神经胶质瘤细胞侵袭

迈克尔·贾辛卡等人。 癌症研究. .

摘要

恶性胶质瘤的一个显著特征是单个肿瘤细胞固有的扩散能力，导致现有治疗方法无法改变这些致命脑肿瘤的进展和复发。遗憾的是，胶质瘤细胞固有侵袭性的机制尚不清楚。在这里，我们首次报道吞噬和细胞运动1（ELMO1）和胞质分裂1（Dock180）的特异性因子，一种双组Rac1鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF），明显与胶质瘤细胞的侵袭表型有关。对原发性人脑胶质瘤标本的免疫组织化学分析显示，ELMO1和Dock180在侵袭区域的主动侵袭肿瘤细胞中高表达，但在这些肿瘤的中心区域没有表达。与正常人星形胶质细胞相比，在各种人脑胶质瘤细胞系中也发现ELMO1和Dock180的高表达。抑制内源性ELMO1和Dock180的表达可显著阻止体外和脑组织切片中胶质瘤细胞的侵袭，同时减少Rac1的激活。相反，ELMO1和Dock180在内源性表达水平较低的胶质瘤细胞中的外源性表达增加了它们在体外和脑组织中的迁移和侵袭能力。这些数据表明，双组GEF，ELMO1和Dock180在促进癌细胞侵袭方面发挥着重要作用，并可能成为治疗弥漫性恶性胶质瘤的潜在治疗靶点。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
ELMO1和Dock180在原发性人脑胶质瘤标本的侵袭肿瘤细胞中共表达。A、，共分析了53份单个原发性肿瘤标本（WHO 2-4级），并使用多克隆兔抗ELMO1抗体对多形性胶质母细胞瘤（J154级标本）组织的系列切片进行了代表性染色(a、 c（c），以及e（电子）)和山羊抗Dock180多克隆抗体(b、 d日，以及（f）)如图所示。c（c）到f、 插图，显示相同区域的同种匹配免疫球蛋白G对照。c（c）和日期：，肿瘤肿块的放大中心区域如图所示一和b条(白色矩形).e（电子）和f、，扩大的侵入区域如所示一和b条(红色矩形).箭头，ELMO1阳性染色(c（c）和e（电子）)和船坞180(（f）).箭头，未染色细胞。原始放大倍数，×100(一和b条)；400× (c–f). 具有代表性的结果；免疫组织化学(国际控股公司)另外进行了两次分析，结果相似。B、，肿瘤中心的免疫印迹分析(C类)和入侵边界(B类)原发性胶质瘤标本。从正常大脑和少突胶质瘤显微切割的胶质瘤组织中提取的总蛋白(外径。; J181标本，2级），间变性星形细胞瘤(答：。; J10和J165标本，3级）和多形性胶质母细胞瘤(GBM公司; 标本J151、J152和J153，4级）分别用抗Dock180和抗ELMO1抗体进行免疫印迹检测。用抗β-肌动蛋白抗体检测细胞膜，作为负荷对照。具有类似结果的三个独立实验的代表。
图2
图2
Dock180和ELMO1在各种人脑胶质瘤细胞系中的内源性表达。正常人星形胶质细胞的免疫印迹分析(国家公路局)，转基因正常人星形胶质细胞(国家公路局/欧洲公路局; 参见材料和方法），并用抗Dock180和抗ELMO1抗体裂解人脑胶质瘤细胞。还用抗β-肌动蛋白抗体作为负载对照对膜进行了探测。具有类似结果的三个独立实验的代表。
图3
图3
抑制内源性ELMO1和Dock180抑制胶质瘤细胞中Rac1的GTP负载。A类和B、，用ELMO1 siRNA瞬时转染LN229、U373MG和SNB19细胞(E1级和E2级)，Dock180 siRNA(天)或对照siRNA(C类). 使用抗ELMO1、抗Dock180和抗Rac1抗体进行免疫印迹分析，并使用Rac1活化分析试剂盒对Rac1的GTP负载进行分析。C、，用ELMO1 siRNA瞬时转染LN229、U373MG和SNB19细胞，并用蛋白酶体抑制剂MG132（2μmol/L）或ALLN（4μmol/L）处理，然后免疫印迹ELMO1、Dock180和Rac1表达和Rac1GTP负载。用抗β-肌动蛋白抗体检测细胞膜，作为负荷对照。具有类似结果的三个独立实验的代表。
图4
图4
抑制内源性ELMO1和Dock180抑制胶质瘤细胞迁移和侵袭。A、 在体外细胞迁移试验。用指示的siRNAs瞬时转染LN229、U373MG和SNB19细胞，然后进行细胞迁移分析。B、 在体外细胞侵袭试验。用所指示的siRNA瞬时转染LN229、U373MG和SNB19细胞，然后进行侵袭测定。在10个随机高倍视野（总放大率为−200）中对迁移或入侵细胞进行计数。迁移或侵入对照细胞的平均数量：迁移时，LN229细胞，94.2±4.6个/场；U373MG细胞，73.1±2.8/场；SNB19，113.3±3.8/场；对于侵袭，LN229细胞为46.7±1.4/场；U373MG细胞，56.2±1.9/场；SNB19，37.2±2.4/场。柱，对照siRNA细胞百分比；酒吧，SD.*，P（P）<0.05，单因素方差分析，然后是Newman-Keuls事后分析。三个独立实验一式三份，结果相似。C、，表达GFP的SNB19和U373MG细胞（数据未显示）瞬时转染所示的siRNAs，然后进行体外脑切片侵袭试验。使用连接在立体显微镜上的数码相机以×40的放大倍数拍摄表达GFP的SNB19细胞的代表性表观荧光图像。D、，SNB19和U373MG细胞侵入小鼠脑切片的深度。柱，每对5到7次重复进行的6个独立实验（对照siRNA转染细胞与特定siRNA转导细胞）在48小时内侵入的平均距离（μm）；酒吧，SE.*，P（P）<0.05，单因素方差分析，然后是Newman-Keuls事后分析。在比较对照siRNA转染细胞和未转染细胞时，SNB19和U373MG细胞株的非转染对照也未显示出对细胞活力或侵袭能力的明显影响（数据未显示）。
图5
图5
Dock180和ELMO1的外源性表达促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。A、，用所示质粒瞬时转染U87MG和U251MG细胞。通过免疫印迹分析ELMO1和Dock180的表达情况。B类和C、，用所示质粒瞬时转染U87MG和U251MG细胞，然后进行细胞迁移分析(B类)或细胞侵袭试验(C类).D、，用所示质粒瞬时转染表达GFP的U87MG细胞，并用体外脑切片侵袭试验。柱，每对5到7个重复进行的四个独立实验（对照转染细胞与ELMO1和Dock180转染细胞）在48小时内侵入的平均距离（μm）；酒吧，SE.*，P（P）<0.05，配对学生t吨测试。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Maher EA、Furnari FB、Bachoo RM等。恶性胶质瘤：严重问题的遗传学和生物学。基因开发2001；15:1311–33.-公共医学
    1. Giese A、Bjerkvig R、Berens ME、Westphal M。迁移成本：恶性胶质瘤的侵袭和治疗意义。临床肿瘤学杂志。2003;21:1624–36.-公共医学
    1. Etienne Manneville S，Hall A.Rho细胞生物学GTP酶。自然。2002;420:629–35.-公共医学
    1. Servotte S、Camby I、Debeir O等。神经降压素对人U373胶质母细胞瘤细胞运动特性的体外影响。神经病理学应用神经生物学。2006;32:575–84.-公共医学
    1. Tran NL、McDonough WS、Savitch BA等。成纤维细胞生长因子诱导的14表达水平升高通过Rac1和核因子-κB促进胶质瘤细胞侵袭，并与患者预后不良相关。2006年癌症研究；66:9535–42.-公共医学

出版物类型

MeSH术语